типичные хроматограммы стандартных смесей свободных желчных кислот и их производных.

В этих экспериментах растворы Na4P2O7(30 ммоль/л),

KNaHPO4(10 ммоль/л) и раствор NAD в ацетонитриле (4

ммоль/л) смешивали в соотношениях 48:30:22 (подвижная фаза А) и 40:30:30: (подвижная фаза Б). NAD примешивали к

подвижной фазе с тем, чтобы повысить чувствительность детектирования. Подвижную фазу А использовали в качестве

начального элюента, который через 10 мин заменяли подвижной фазой Б. Потенциал рабочего электрода устанавливали

равным 0,80 В относительно серебряно-хлоридсеребряного.

электрода сравнения. Пределы обнаружения для свободных!

желчных кислот и их производных составляли примерно 0,3 -I

1 нг. |

В работе Хираты и сотр. [17] описана аналогичная пленочная ячейка объемом 0,15 мкл с рабочим электродом, изготовленным из Прокаленного под давлением пирографита. Авторы применили эту ячейку для определения метаболитов тирозина и триптофана в моче. Разделение проводилось на микроколонке длиной 60 м, заполненной частицами пористого сили-кагеля (60 мкм). Разделение проводили при малой объемной скорости (1 мкл/мин). В качестве подвижной фазы использовали 0,2 М ацетатный буфер (рН 4,0). Искомые метаболиты детектировались путем измерения окислительного тока при потенциале рабочего электрода 1,00 В относительно насыщенного каломельного электрода.

Киехт и сотр. [19] разработали для капиллярной ВЭЖХ трубчатую ячейку с электродом из графитового волокна диаметром 9 мкм и длиной около 0,7 мм. Электрод с помощью микроманипулятора вводили в выходной конец капиллярной колонки 265 см х 15 мкм (внутр. диам.). Графитовое волокно помещали в специальный стеклянный кожух, заполненный электролитом (0,1 М раствором хлорида калия). В тот же электролит погружали серебряно-хлоридсеребряный электрод-Ячейку испытывали в окислительном режиме посредством простого двухэлектродного устройства. При линейной скорости элюента в интервале около 4 - 5 мм /с электролитическая эффективность системы приближалась к 100%. Пределы обнаружения для аскорбиновой кислоты, пирокатехинамина и 4-мк тилпирокатехинамина достигали порядка 1 фмоль/л (10' моль/л).

115

Рис. 4-14. Типичные хроматограммы стандартного раствора смеси свободных и связанных желчных кислот, полученные с помощью вольтамперометрнческого детектора с применением послеколоночной дериватйзацни разделенных компонента» а производные За-HSD [20].

а - свободные желчные кислоты, б - конъюгаты глизнна, в -конъюгаты таурина. Потенциал электрода 0,80 В относительно Ag/AgCI; подвижная фаза указана в тексте-, объемная скорость 8,3 мкл/мин. Компоненты (содержание • пробе каждого из них 80 нг): UDCA - урсодезоксихолевая киста, СА - холеная кислота, CDCA - хенодезокснхолевая кислота, DCA - де-зоксихолевая кислота, LCA - литохолевая кислота, GUDCA - мшхОурсодезок-сихолевая кислота. GCA - глнкохолевая кислота, CCDCA - гликогенодезоксн-«олевая кислота, ОСА - глнкодезоксихолевая кислота, CLCA - гликолитохоле-кислота, TUDCA - тауроурсодезоксихолевая кислота, ТСА - таурохолевая "и слота, TCDCA - таурохенодезоксихолевая кислота, TDCA - тауродезоксихо-"евая кислота, TLCA - тауролнтохолевая кислота.

Ш4

Ш4. Детектирующие системы

Рубчатая ячейка для микроколонок, разработанная Гото и| сотр. [18], изображена на рис. 4-15. Графитовое волокно диа-1 метром 7 мкм и длиной 15 мм, служащее рабочим электро-1 дом, вводится в трубку из кварцевого стекла внутренним дИ-| аметром 50 мкм. Другой конец трубки соединяется с выходом! хроматографической микроколонки. Элюат вытекает через ог-Г верстие диаметром 1 мм, просверленное в стенке фторопласто-1 вой трубки. Серебряно-хлоридсеребряный электрод сравнения и| платиновый противоэлектрод помещают в каплю раствора! электролита, .находящегося вблизи выхода элюата. Описанную! ячейку использовали для детектирования катехоламинов, кото-1 рые разделялись на микроклонке из кварцевого стекла разме-1 ром 50 мм х 0,35 мм (внутр. диам.), заполненной частицами! кремнезема (3 мкм), модифицированного ОДС. На рис. 4-1б| представлена типичная хроматограмма стандартного раствора.! Пределы обнаружения для каждого из четырех катехоламинов! составляли примерно 1-3 пг, линейный динамический диапазон] достигал 103.

3 7

j. Детектирующие системы

Рис.' 4-16. Типичная хроматограмма стандартного раствора четырех катехоламинов, полученная с применением вольтамперометрического детектора с трубчатой ячейкой из кварцевого стекла [18] (с разрешения авторов). Колонка 50 мм х 0,35 мм (внутр. диам.), неподвижная фаза кремнезем, модифицированный ОДС (3 мкм); подвижная фаза метанол/фосфатный буфер (рН 3,0), содержащий 0,4 ммоль/л 1-октил-сульфоната и 0,2 ммоль/л ЭДТА (1:9); объемная скорость 4,8 мкл/мин.

Пики (содержание каждого компонента в пробе 100 пг): / - норадрена-лин, 2 - адреналин, 3 - дофа, 4 - дофамин.

0 3 В 9 I, мин

117

# в

Рис. 4-15. Трубчатая ячейка с электродом, изготовленным из углеродного волокна [18] (с разрешения авторов).

/ - т