химический каталог




Введение в микромасштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию

Автор M.Гото, К.Джинно, Д.Исии, M.Сайто, M.Сенда и др.

пе его можно наблюдать под любым углом, однако на практике интенсивность флуоресценции обычно измеряют в направлении, перпендикулярном направлению возбуждающего излучения. Благодаря этому последнее не мешает наблюдению флуоресценции, и в результате снижается фон и шум. Уда .? я конструкция кюветы, обеспечивающая эффективное измерение флуоресценции в малом объеме жидкости, описана в работе [12]. В этой системе тонкая проточная кювета помещена в центр* вогнутого зеркала. Она освещается лучом возбуждающего ультрафиолетового излучения, которое падает на зеркало с тыль1 Детектирующие системы 105

ной стороны и проходит сквозь прозрачное отверстие в его центре. Флуоресцентное излучение собирается тем же вогнутым зеркалом [13, 14].

Поскольку источником флуоресцентного излучения являются возбужденные молекулы определяемого компонента, то его интенсивность должна быть пропорциональна числу облученных молекул и, следовательно, объему раствора, подвергнутому облучению. Однако интенсивность реально наблюдаемого флуоресцентного излучения вычислить так просто не удается по трем причинам. Во-первых, интенсивность луча возбуждающего облучения ослабляется по экспоненциальному закону вследствие поглощения его по мере проникновения в толщу раствора. Во-вторых, испускаемое молекулами вещества флуоресцентное излучение также поглощается раствором. И наконец, выходной сигнал детектора в значительной степени зависит от эффективности измерения интенсивности флуоресценции. Поэтому интенсивность флуоресценции (или, точнее, выходной сигнал флуоресцентного детектора) всегда выражается в произвольных или относительных единицах, и, как следствие, флуоресцентный детектор (в отличие от детекторов по поглощению излучения) не позволяет провести никаких абсолютных измерений.

Детектирующие системы можно подразделить на три типа:

1) фильтр/фильтр,

2) монохроматор/фильтр,

3) монохроматор/монохроматор (спектрофлуориметр).

Система первого типа (фильтр/фильтр) недорога и пригодна для серийного анализа, например для определения аминокислот с послеколоночным превращением их в необходимые

производные (см. гл. б). В качестве источника возбуждающего

излучения широкое распространение получили ртутные лампы.

Излучение этих ламп содержит лишь несколько дискретных

линий с определенными длинами волн. Чаще всего используются длины волн 254 и 365 нм; другие линии применяются

реже из-за относительно слабой энергии излучения и отсутствия подходящих оптических фильтров.

Система второго типа (монохроматор/фильтр) более селективна и универсальна, поскольку оператор может выбрать для возбуждения излучение с любой длиной волны. Для детекторов этого типа в качестве источников возбуждающего излучения применяются лампы с непрерывным спектром испускания, например ксеноновые или дейтериевые.

Система третьего типа (монохроматор/монохроматор) наиболее селективна и универсальна, поскольку длина волны как возбуждающего, так и измеряемого вторичного излучения может быть произвольно выбрана оператором. В некоторых случаях с помощью спектрофлуориметра удается детектировать

йй

искомое соединение в группе плохо разделенных хроматогра-фических пиков [15]. Некоторые спектрофлуориметры могут быть использованы также в системах фильтр /фильтр и много-хроматор/фильтр с применением возбуждающего излучения так называемого нулевого порядка и подходящих светофильтров. Излучение нулевого порядка получается путем поворота спектральной решетки на такой угол, при котором решетка начинает работать как простое зеркало. В спектрофлуоримет-рических детекторах, специально предназначенных для ВЭЖХ, ширину спектральных линий устанавливают большей, чем в спектрофлуориметрах общего назначения (обычно 10-20 нм), чтобы повысить чувствительность анализа.

4.3.2. Зависимость чувствительности определения от объема проточной кюветы

Все рассуждения о максимально допустимом объеме кюветы, приведенные в гл. 2, справедливы и для флуоресцентного детектора, однако здесь дело обстоит несколько сложнее, чем для УФ-детектора. При детектировании по поглощению излучения чувствительность можно сохранять постоянной до тех пор, пока при, уменьшении объема кюветы удается сохранить неизменной длину пробега луча. При флуоресцентном же детектировании чувствительность пропорциональна объему облучаемого раствора. Следовательно, уменьшая объем ячейки, необходимо учитывать и вклад объема кюветы в расширение пика, и уменьшение чувствительности в результате уменьшения объема раствора. Найти оптимальное решение порой не так просто. Если уменьшить объем кюветы детектора пропорционально объему пика, то в той же пропорции уменьшиться также и объем облучаемого раствора, что приведет к уменьшению массовой чувствительности детектора, хотя концентрация определяемого компонента в растворе и будет существенно выше, чем при использовании обычных колонок.

Поскольку одним из важнейших преимуществ флуоресцентного детектора является его высокая чувствительность, то на практике объем кюветы определяется объемом п

страница 29
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58

Скачать книгу "Введение в микромасштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию" (2.4Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
горки 2 рублево успенское шоссе тайм 1
гостиница азимут в дрездене
клуб театр на барклая
спортивный костюм москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(16.12.2017)