сплошными линиями, соответствует уменьшению продолжительности анализа в 10 раз. Если разделение ведется на колонке 4,6 мм (внутр. диам.) х 50 мм, объемная скорость составляет 2 мл/мин, то продолжительность анализа на обычном приборе для ВЭЖХ можно сократить на 90%. В полумикро-ВЭЖХ аналогичного результата можно достигнуть, используя колонку 2,1 мм (внутр. диам.) х 100 мм при объемной скорости подвижной фазы 800 мкл/мин. Для 4,6 мм (внутр. диам.) 50 мм объем наблюдаемого пика составляет 20% объема пика, получаемого на обычной колонке, а для колонки 2,1 (внутр. диам.) х 100 мм - всего 10% объема пика обычной колонки. Следовательно, для обеих колонок необходим детектор с объемом кюветы не более 1-2 мкл.

Чтобы суспензия была достаточно однородной, необходим растворитель, имеющий высокое сродство к насадочиому материалу. Целесообразно использовать также поверхностно-активные присадки. При неудачной подготовке растворителя для суспензии насадочный материал начнет слипаться и образовы-^ть комки. В табл. 3-2 указаны составы растворителей, использованные Кувата и сотр. [62] для получения суспензий кремнезема с привитым ОДС (лихросорб RP-18) и кремнезема с привитыми аминогруппами (нуклеосил 5NH2). Для улучшения однородности суспензии в раствор добавляли метанол ? g4 3. Микроколонки

поверхностно-активное вещество нониполь 40 (нонилфениловый эфир полиэтиленгликоля ).

Вследствие различия в плотности насадочного материала и растворителя первый может постепенно осаждаться. Для поддержания стабильности суспензии обычно применяются "суспензии со сбалансированной плотностью" [63] или "высоковязкие суспензии" [64], что позволяет предотвратить осаждение насадочного материала во время набивки колонки.

В первом случае выбирается такой ? растворитель, плотность которого равна плотности материала насадки. Благодаря этому осаждение последнего из суспензии не происходит. Чтобы уравнять плотности материала насадки и растворителя, в качестве растворителей пользуются галогенсодержащими соединениями, отличающимися высокой плотностью (см. табл. 3-3). Однако эти растворители токсичны и требуют осторожного обращения, поэтому данный прием в настоящее время не имеет столь широкого, как раньше, распространения.

Таблица 3-3. Растворители,, рекомендуемые для регулировки плотности при суспензионном заполнении колонок

Растворитель Плотность, г/мл

Дииодметан 3,0

1,1,2.2-Тетрабромэтаи 3.0

Дибромметан 2.5

Иодметан 2.3

При заполнении колонок высоковязкими суспензиями скорость осаждения насадочного материала в процессе заполнения уменьшается путем повышения вязкости суспензии. С этой целью в суспензию вводят изопропанол или циклогексанол (см. табл. 3-2). Применяются и другие растворители, в том числе н-гексанол, полиэтиленгликоль 200, этиленгликоль и глицерин. Важно, чтобы каждый участок насадки в колонке подвергался одинаковому давлению и чтобы вся насадка была однородной. Были испытаны следующие методы:

1. Растворитель подается при контролируемой объемной

скорости таким образом, чтобы обеспечить постоянное давление в течение всего процесса заполнения.

2. Давление в процессе заполнения постепенно повышается

[62]. Если заполнение колонки проводится при постоянном

давлении, объемная скорость в начале и в конце операции суi. Микроколонки 85

щественно различается. Указанный прием позволяет также уменьшить изменение объемной скорости в процессе заполнения колонки.

3. Применение ограничителя, препятствующего резкому падению давления сразу по окончании набивки колонки [65]. Этот вариант метода также позволяет уменьшить изменение объемной скорости.

Насос, применяемый для набивки полумикроколонок, должен обеспечивать подачу растворителя с объемной скоростью порядка нескольких миллиметров в минуту при давлении до 500 кг/см2. Для этой цели пригодно большинство коммерческих насосов для ВЭЖХ. Если для набивки колонки используется циркуляционный насос, работающий при постоянном расходе, а не пневматический насос постоянного давления, то достигаемое давление сильно зависит от сопротивления системы потоку. Последнее изменяется во времени в процессе набивки, поскольку максимальная объемная скорость для насосов этого типа обычно не превышает 10 мл/мин. В результате реальное давление часто не может достигнуть заданной величины из-за слишком малого сопротивления потоку до тех пор, пока в колонку не будет введено достаточное количество насадочного материала. После этого сопротивление колонки становится достаточно большим, давление в насосе достигает заданной величины и скорость потока регулируется автоматически.

Благодаря вязкостному сопротивлению потоку слой насадки в колонке формируется под определенным давлением. Давление, приложенное к тому или иному участку насадки в колонке, непосредственно не связано с рабочим давлением насоса или видимым перепадом давления на колонке, а зависит от объемной скорости. Поэтому, если в процессе набивки объемная скорость уменьшается (что, естественно, происходит при постоянном давлении на в