ом размывание пика не зависит от размеров колонки.

JI

а. Обычная колонка

3.7.2. Аппаратура

Если разделение ведется на полумикроколонке, наиболее важную роль играет то обстоятельство, что в этом случае обычная аппаратура для ВЭЖХ нуждается в очень небольших изменениях. Практически они сводятся лишь к замене дозатора и детектора на аналогичные узлы с меньшими размерами.

so

3. Микооколонки

1. Микооколонки

3.7.3. Чувствительность

Как было показано в гл. 2, для проб одинаковой массы при одинаковых условиях хроматографирования концентрация компонента в максимуме пика, элюированного из полумикроколонки, в 10 раз выше, чем в пике, элюированном из обычной колонки [60]. На рис. 3-27 сравнивается чувствительность анализа при разделении по методу ВЭЖХ на полумикроколон-ке и обычной колонке. Поскольку в приборе с полумикроко-лонкой используется УФ-детектор с кюветой в 5 мм, а в хроматографе с обычной колонкой - такой же детектор с кюветой , в 10 мм, то, как показывает прямое сопоставление, чувствительность полумикросистемы выше в 5 раз.

вводе до 40 - 50 мкг заметного уменьшения эффективности не наблюдалось. Если хроматографическая система оснащена УФ-детектором, то масса пробы составляет от 1 нг до 1 мкг; если же применяется флуоресцентный детектор, то она лежит в пределах от I пг до 1 нг, следовательно, максимальный размер пробы в 40 - 50 мкг вполне достаточен почти во всех случаях. Для обычной колонки максимальный размер пробы составляет около 1 мг.

3.7.5. Расход растворителя

Поскольку объем полумикроколонки равен примерно 1/10 объема обычной колонки, объемная скорость элюента, необходимая для достижения одинаковой с обычной колонкой линейной скорости, также составляет около 1/10 объемной скорости, применяемой в обычной колонке. Благодаря этому при одних и тех же условиях и одной и той же ожидаемой продолжительности анализа расход растворителя при разделении на полумикроколонке составляет всего около 10% объема растворителя, необходимого для разделения на обычной колонке. Применительно к рутинному анализу это означает существенную экономию ресурсов лаборатории. Если же применяемый в качестве подвижной фазы растворитель очень дорог или опасен для людей и окружающей среды, то снижение его потребления имеет еще более важное значение. Экономически немаловажно также и то обстоятельство, что количество насадки, необходимое для заполнения полумикроколонки, не превышает 10% того количества насадки, которое расходуется при заполнении обычных колонок.

3.7.4. Объем пробы

Размер пробы, которую можно ввести в колонку, не сни*« жая эффективность разделения, зависит от объема колонки. Поскольку последний пропорционален квадрату внутреннего диаметра колонки, допустимый объем вводимой пробы быстро падает с уменьшением этого диаметра. На рис 3-28 показана ' зависимость между массой введенной пробы и эффективностью колонки. В полумикроколонку 1,5 мм (внутр. диам.) х 250 мм), заполненную силикагелем с привитым ОДС, вводили бензол (?' - 4,5). Как следует из указанной зависимости, при

3.7.6. Высокоскоростной анализ

В последнее время предпринимаются попытки сократить продолжительность анализа, не снижая эффективности разделения [8-12]. Один из способов ускорения анализа состоит в Уменьшении длины колонки. Однако, поскольку число теоретических тарелок пропорционально длине колонки, то простое Уменьшение ее длины приведет к ухудшению разделения. Чтобы этого не случилось, обычно укороченные колонки заполняют насадкой с более мелкими частицами. Сократить продолжительность анализа можно также, увеличивая линейную (и соответственно объемную) скорость подвижной фазы. Однако при этом возрастает давление на входе и расход растворителя, Между тем максимальное входное давление ограничено техническими параметрами применяемого прибора. На рис. 3-29 поwr

j. Микооколонки ЯЗ

3.7.7. Изготовление полумикроколонок

Готовые колонки для полумикро-ВЭЖХ в настоящее время выпускаются многими фирмами [61 ]. Однако ассортимент их по сравнению с ассортиментом колонок для обычной ВЭЖХ более скуден, поэтому исследователю часто приходится изготавливать полумикроколонки самому, пользуясь обычными материалами.

3.7.7а. Материалы на базе кремнезема. Полумикроколонки заполняют суспензионным методом точно так же, как и обычные колонки. Насадочный материал диспергируют- в растворителе и получают суспензию. Эту суспензию заливают в сосуд, к которому присоединена пустая колонка. После этого в сосуд под давлением подают растворитель, вытесняя суспензию в колонку. Чтобы пользуясь этой методикой, можно было получить высокоэффективную колонку, необходимо соблюдать три условия:

1. Суспензия насадочного материала в растворителе должна быть как можно более однородной.

2. В процессе набивки колонки суспензия должна находиться в стабильном состоянии.

3. В процессе набивки в сосуде должно поддерживаться достаточно высокое давление.

казана взаимосвязь между объемной скоростью подвижной фазы и внутренним диаметром колонки. Область, ограниченная