т; 8 - ди-2-этилгексилфталат; 9 - динонилфталат.

3^>.2. Изготовление насадочных капиллярных Колонок

Оксид алюминия или силикагель тщательно высушивают, насыпают в трубку из мягкого стекла (внутренний диаметр 0,25-0,6 мм и наружный диаметр около 6 мм) и уплотняют насадку вибрацией. Далее эту трубку на специальной установке вытягивают в капилляр, диаметр которого можно регулировать путем изменения скорости вытяжки и/или) диаметра исходной стеклянной трубки. Более предпочтительны трубки из мягкого, а не из боросиликатного стекла, поскольку первое размягчается при менее высокой температуре, а с повышением температуры увеличивается вероятность повреждения насадки. В работе [55] описано изготовление колонок с различными химически привитыми неподвижными фазами in situ путем пропускания силанизирующих реагентов через капилляр.

7JL

3, Микооколонки

1 Мшаюколонки

Л

3.6.3. Аппаратура

Работа с насадочными капиллярными колонками в ЖХ связана с рядом технических трудностей, аналогичных тем, с которыми сталкивается исследователь при работе с безнасадоч-ными капиллярными колонками. Для достижения очень малых объемных скоростей подачи элюента (1 мкл/мин и меньше) применяют деление потока [54]. Осуществляется также ступенчатое градиентное элюирование [56]. Пробы либо непосредственно вводятся в колонку [56], либо применяется метод деления пробы [54]. Для детектирования используются модифицированные УФ-спектрометры [54-56] и флуоресцентные спектрометры [56], а также электрохимические детекторы [57].

3.6.4. Характеристики насадочных капиллярных колонок

Эффективность колонки определяется отношением ее диаметра к диаметру частиц насадки. Для насадки с частицами диаметром 30 мкм оптимальное отношение равно 2 - 3, а для насадки с частицами размером 10 мкм несколько выше: 4-6. Если это отношение превышает 10, то становится возможным перемещение частиц в колонке в направлении потока элюента.

На рис. 3-25 изображена хроматограмма ароматических соединений, содержащихся в каменноугольной смоле, полученная методом ступенчатого градиентного элюирования на колонке 70 мкм (внутр. диам.) х 55 м, заполненной основным оксидом алюминия, к поверхности которого привит ОДС [55].

На рис. 3-26 показано разделение фталатов на колонке 47 мкм (внутр. диам.) х 10,3 м, заполненной силикагелем [58]. Эффективность этой колонки, рассчитанная по последним двум пикам, составляет соответственно 68 000 и 53 000 теоретических тарелок.

ю

Время, ч'

VC'J?t Разделе™е *та?атов на ??асадо.июй капиллярной колонке. Колонка

too Г/сЗ"утр-ди-ам'х 10'3 м:„ "асад,ка диоксид ?»

эои кг/см"; линейная скорость 4,4 см/с.

Пики: ; - дидецил-, 2 - дииопил- и диоктил-, 3 - дигептил- 4 - ли-циклогептнл-. S - дибутнл-, 6 - днпропнл-. 7 - диэтил-. 8 «шет^фталат

3.7. ПОЛУМИКРОКОЛОНКИ

3.7.1. Введение

Хроматографическое разделение на микроколонках рассматривается во многих публикациях. Чтобы отличать микроколонки от колонок обычного размера, авторы используют несколько разных терминов. По Бейзи и Оливеру [59], чаще всего в литературе применяются термины, перечисленные в' табл. 3-1. Однако по этим терминам очень трудно судить о внутреннем диаметре колонок, поскольку они лишь указывают

f Микуоколонт

Достаточно, например, установить в прибор миниатюрный кран-дозатор с вводимым объемом 1-3 мкл и детектор с проточной микрокюветой объемом 1 - 2,5 мкл. Что касается насоса, то большинство обычных насосов для ВЭЖХ обеспечивают подачу элюента со скоростями, приемлемыми для полумикроколонок (100 - 300 мкл/мин). Таким образом, замена обычной на полумикроколонку не требует никаких специальных приспособлений, необходимых при работе с микроколонка-ми, объем которых составляет менее 1/100 объема обычных колонок.

на то, что размеры этих колонок меньше обычных. Поэтому, пользуясь этими названиями, следует также указывать размеры колонок. Более того, как уже указывалось в гл. 2, классификация колонок по одному только внутреннему диаметру недостаточна, колонки следует классифицировать по их объемам. Выше мы решили называть колонки, объем которых составляет около 1/10 объема обычных колонок (внутренний диаметр 4,6 мм и длина 250 ыЫ), а объем пика неудерживаемого компонента равен примерно 10 мкл, полумикроколонками.

. Полумикроколонки необходимо отличать от настоящих^ микроколонок, объем которых составляет менее 1/100 объема обычных колонок. В соответствии с таким определением, к типичным полумикроколонкам относятся колонки следующих размеров:

Внутренний диаметр, мм Длина, мм

1.0 500 1,5 250

2.0 100

В настоящее время получили распространение колонки внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 25 - 30 мм. Они также относятся к полумикроколонкам. Смысл этой классификации состоит в том, что для всех полумикроколонок объем неудерживаемого пика равен примерно 10 мкл. При одном и том же объеме пика могут применяться любые системы ВЭЖХ, дающие одинаковое инструментальное размывание полосы (суммарный объем внеколоночного пика). При эт