зделить на несколько типов в зависимости от их размеров и типа насадки. В данной главе мы рассмотрим характеристики открытых (безнасадочных) и насадочных капиллярных колонок внутренним диаметром 0,1 - 0,5 мм, объемы которых в 100 -2000 раз меньше объема' обычной колонки для ВЭЖХ внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм. В этой главе мы также обсудим, какое оборудование необходимо для работы с такими колонками, каковы способы их изготовления, в чем заключается их предварительная подготовка и рассмотрим целесообразность применения в микро-ВЭЖХ необычных подвижных фаз.

I 3.2. НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ 3.2.1. Насосы

Чтобы время удерживания не менялось с изменением радиуса колонки, объемную скорость нужно регулировать таким образом, чтобы линейная скорость оставалась постоянной. Следовательно, для микро-ВЭЖХ необходим насос, обеспечивающий объемную скорость от 1 до 10 мкл/мин. Как уже говорилось в гл. 2, микронасосы высокого давления в настоящее время выпускаются серийно. В качестве насоса в микро-ВЭЖХ может также использоваться газоплотный шприц с механической подачей, способный выдерживать давление около 70 бар. Объемная скорость, обеспечиваемая таким насосом, зависит от размеров шприца, и скорости менее 1 мкл /мин поддерживаются с достаточно высокой точностью.

D- Ishii, т. Takeuchi, Department of Applied Chemistry, Faculty of Engineering, Nagoya University, Chikusa-ku, Nagoya 464, Japan. A. Wada, Japan Spectroscopy Company, Ltd., Hachioji City, Tokyo 192, Japan.

3. Микроколонки

1. Микпоколонки

3.2.2. Дозаторы

Вводимый объем следует выбирать очень осторожно, сообразуясь с размерами колонки. Для колонки внутренним диаметром 0,25 мм и длиной 100 мм его следует уменьшить примерно до 0,02 мкл (см. гл. 2). Такой маленький объем можно вводить с достаточно хорошей воспроизводимостью (например, посредством миниатюрного крана-дозатора ML-422 фирмы JASCO). Изменение' вводимого объема осуществляется путем изменения диаметра отверстия в диске ротора. Упомянутый дозатор снабжается несколькими дисками с различным дозируемым объемом. Краны-дозаторы типа Rheodyne 7520 и EYELA 5001" (Япония), основаны на том же принципе, что и дозатор ML-422. Следует заметить, что кран-дозатор EYELA 5001 может обеспечить ввод шести различных объемов (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 1 мкл).

Соединительная трубка между колонкой и дозатором также играет важную роль. Чтобы не увеличивать внеколоночное размывание пиков, следует пользоваться трубками внутренним диаметром не более 50 - 70 мкм. Упомянутые выше дозаторы рассчитаны на подключение к хроматографической системе с помощью трубок наружным диаметром 1/16 дюйма (1,6 мм). Трубки столь малого внутреннего диаметра промышленностью не выпускаются. Однако для соединения колонки с дозатором пригодны трубки из нержавеющей стали наружным диаметром 1/16 дюйма (1,6 мм) с вкладышем из кварцевого стекла или нержавеющей стали, имеющим достаточно узкий внутренний канал. Правда, изготовить их довольно трудно.

3.2.3. Детекторы

В ВЭЖХ применяются детекторы разных типов. Наибольшее распространение получили спектрофотометрические (для УФ- и видимой области спектра) и флуоресцентные, а также электрохимические детекторы и рефрактометры. Возможности, обеспечиваемые этими детекторами, и проблемы, возникающие при работе с ними, рассмотрены в гл. 4 - 6. Здесь же мы лишь кратко остановились на использовании в микро-ВЭЖХ спектрофотометрических детекторов УФ- и видимой области спектра.

**Muromachi 4-2, Nihonbashi, Chuo-ku, Tokyo, Japan.

Кюветы спектрофотометрических детекторов можно подраз? Выход

УФ Вход

Рис. 3-1. Проточные кюветы с параллельными

(а) и пересекающимися

(б) потоками.

УФВыход

делить на два типа: кюветы с параллельными и с пересекающимися потоками (рис. 3-1). Кюветы первого типа позволяют достигнуть максимальной чувствительности, однако изготовить такую микрокювету сложно. Кюветы второго типа изготавливают из кварцевого цилиндра, это проточная кювета, и мертвый объем соединительной трубки между колонкой и нею легко свести к минимуму. Диаметр кюветы с пересекающимися потоками близок к диаметру хроматографической колонки. Эта конструкция менее универсальна, но зато в данном случае кюветой может служить выходной конец хроматографической колонки, изготовленной из кварцевого стекла [1 ].

В микро-ВЭЖХ можно использовать также многоканальный спектрофотометрический детектор УФ- и видимого диапазона с фотодиодной гребенкой. Он позволяет сократить число оптических узлов, например линз или зеркал, и уменьшить Расстояние между источником света и кюветой или между кюветой и дифракционной решеткой [2].

3.2.4. Аппаратура для градиентного элюирования

Градиентное элюирование в ВЭЖХ позволяет существенно уменьшить продолжительность и повысить селективность анализа. Авторы работ [3, 4] исследовали пригодность этого «етода для микро-ВЭЖХ [3, 4]. Хотя микронасосы, позвал яю-?Чие осуществить градиентное элюирование, выпускаются се3. Микооколонки

1 Микоожаменки

(1)

рийно, воспроизв