химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

уемые в разд. 3.2.1, посвящены анализу дозированных лекарственных форм. Анализ таблеток с помощью тетразолиевого синего часто выполняют на автоматических или полуавтоматических анализаторах. На рис. ЗЛО показана схема метода Броуэра [43] для полуавтоматического анализа таблеток преднизолона и преднизона.

266 Главе 3

268 Глава 3

Кортикостероиды 269

3.3.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОРТИКОСТЕРОИДОВ

И ИХ МЕТАБОЛИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦАХ

Подготовка образцов для количественного анализа

Большинство общих положений, рассмотренных в разд. 2.3.3 для половых гормонов, с минимальными видоизменениями пригодны и для кортикостероидов, и поэтому здесь будет дано лишь краткое обсуждение этого вопроса.

Наиболее часто изучаемыми биологическими жидкостями являются моча и кровь. В моче кортикостероиды и их восстановленные метаболиты присутствуют главным образом в виде конъюгатов (в основном в виде глюкуронидов). Поэтому в большинстве случаев определение кортикостероидов в моче начинают с гидролиза конъюгатов, чтобы получить количественные данные об общем содержании кортикостероидов. Расщепление конъюгатов проводят с помощью катализируемого кислотами гидролиза (обычно к 2 мл мочи прибавляют 0,1 мл концентрированной соляной кислоты и выдерживают при комнатной температуре 18 ч [310] или подкисляют пробу до рН 1 серной кислотой и выдерживают при комнатной температуре 20 ч [141] ) или с помощью ферментативного гидролиза под действием р-глюкуронидазы, например при рН 5 и 42°С или при рН 7 и 37°С [132] в течение 16—18 ч [258]. В отличие от анализа мочи целью анализа крови в большинстве работ является определение свободных кортикостероидов, поэтому в большинстве методов определения кортикостероидов в плазме или сыворотке крови стадию гидролиза не включают.

Для экстракции кортикостероидов чаще всего применяют дихлорметан и реже хлороформ. Из полученных экстрактов кислотные примеси обычно удаляют промыванием 0,1 М раствором гидроксида натрия. Достаточно широко используемый метод повышения селективности экстракции заключается во введении стадии предварительной экстракции для удаления непо-' лярных стероидов и других липидов, способных экстрагироваться вместе с кортикостероидами дихлорметаном. Для этой цели пригодны различные насыщенные углеводороды.

Во многих случаях для достижения требуемой селективности необходимы также стадии хроматографической очистки или разделения, но ими пользуются довольно редко. Колоночную, тонкослойную или бумажную хроматографию применяют в тех случаях, когда метод количественного определения недостаточно специфичен, а также если цель анализа состоит в определении минорных компонентов или если специфичность метода и надежность результатов более важны, чем затрачиваемое на выполнение анализа время. Другая причина применения хроматографии для очистки пробы (главным образом на колонках с сефадексом LH-20 и амберлитом XAD-2) перед ферментативным гидролизом — это желательность удаления эндогенных ингибиторов р-глюкоронидазы [132].

Количественное определение

Методы, основанные • на измерении собственного поглощения, не играют заметной роли при определении кортикостероидов в биологических образцах. Среди фотометрических методов, основанных на химических реакциях для определения кортикостероидов в моче [14, 94—96, 132, 232, 258, 271], до сих пор широко используется классический метод Портера—Зильбера [232]. Кроме того, находят применение и методы, основанные на тех же принципах, но с использованием модифицированных реагентов [133, 257, 258].

Из колориметрических методов метод с использованием солей тетразолия и методы, основанные на окислительном отщеплении боковой цепи с образованием формальдегида или 17-ке-тостероидов, которые можно легко определить, стали первыми стандартными методами определения кортикостероидов в биологических образцах. Они до сих пор применяются в некоторых лабораториях, но работы, в которых публикуются результаты их новых применений, теперь появляются редко [89, 265].

Чувствительность методов, основанных на измерении индуцируемой кислотами флуоресценции, значительно выше чувствительности колориметрических методов, но селективность почти такая же. Эти методы, находят и сейчас довольно широкое применение.

Можно сказать, что колориметрические и флуориметрические методы являются простыми, быстрыми и пригодными для применения в недостаточно хорошо оснащенных лабораториях. Однако в первоначальном виде их селективность спорна. Для того чтобы значительно повысить селективность, нужно проводить предварительное хроматографическое разделение анализируемой пробы.

В результате тщательных исследований найдены подходящие производные для газохроматографического изучения кортикостероидов, так что эта проблема, по-видимому, решена. Тем не менее, газовая хроматография играет меньшую роль в определении кортикостероидов в биологических образцах, чем в определении стероидов других классов. Применение газовой хроматографии необходимо при установлении профиля концентраций стероидов, вкл

страница 95
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
штатная магнитола на шевроле круз 2012
рейтинг сковородок для индукционных плит 2016
номера перевертыши купить в москве дёшево
продажагорки металлические

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.05.2017)