химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

дное, легко отделяемое от непрореагировавшего преднизолона экстракцией до радиоиммунного определения.

На заключительной стадии определения отделяют свободные кортикостероиды от связанных с антителом с помощью древесного угля, покрытого декстраном, но возможны и другие способы, в том числе разделение на стенках пробирок с привитым антителом [137].

3.2.9. ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ

фотометрические

и флуориметрические методы

Ферментативные фотометрические и флуориметрические методы определения кортикостероидов основаны на окислении-восстановлении оксикетонных систем, и в частности на восстановлении 20-кетогруппы [3, 4, 5, 136, 137] в присутствии (36)20а-оксистероид—дегидрогеназы. Во всех случаях контроль за реакцией осуществляется при помощи системы НАД(Ф) — НАДН. При этом для измерений используют либо уменьшение концентрации НАДН (спектрофотометрия при 340 нм [3—5]), либо разложение НАДН под действием соляной кислоты и превращение НАД в флуоресцирующее производное путем обработки 6,6 М гидроксидом натрия при 60°С [136, 137]. Для определения 1 ip-оксикортикостероидов предложен [46] также флуориметрический метод, основанный на превращении 116-ок-систероид—НАД (Ф) -оксидоредуктазных систем.

Этими методами можно также решать задачи, связанные с определением гидрокортизона и родственных соединений в плазме [46, 136, 137] и моче [3—5]. Для улучшения избирательности в некоторых случаях применяют также колоночную хроматографию на сефадексе LH-20 [136, 137] или ТСХ [46].

Иммуноферментный анализ

Как и в анализе половых гормонов, для анализа кортикостероидов наряду с РИА стал применяться иммуноферментный анализ. Основные положения разд. 2.2.14 справедливы и для этой области.

Почти все цитируемые ниже работы относятся к определению гидрокортизона в крови [12, 106, 146, 159, 168, 207]*, для

260 Глава 3

Кортикостероиды 261

чего используют как ферментные системы, уже описанные

в разд. 2.2.14 (пероксидаза—о-фенилендиамин—НгОг [159], щелочная фосфатаза — фенилфосфат — 4-аминоантипирин —

KsFe(CN)6 [168, 207, 223], p-D-галактозидаза — о-нитрофенил-РD-галактопиранозид [65, 106, 149в, 149г]), так и другие системы. Аракава и сотр. [12] использовали аналогичную систему

(пероксидаза —меченый гидрокортизон), но определение активности фермента проводили по люминесценции, возникающей при

реакции пероксида водорода с люминолом. Хольдер [146] связывал глюкозоксидазу с 21-гемисукцина-тной цепью гидрокортизона и измерял активность фермента по окраске (ХМакс =

=415 нм), развивающейся при взаимодействии пероксида водорода, являющегося побочным продуктом окисления глюкозы,

с 2,2'-азино-бис(3-этилбензтиазолин-6-сульфо)кислотой.

Фермент-метку обычно вводят в стероид, используя 21-геми-сукцинатную или З-О-карбоксиметильную части молекулы, но заслуживает упоминания также реакция гидрокортизона с щелочной фосфатазой, протекающая с участием 21-аминогруппы [168].

Для разделения фаз используются как иммобилизованное антитело (на сефарозе [12] или целлюлозе [159]), так и метод двойных антител [146, 207].

3.2.10. МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ И РОДСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ

Масс-спектрометрия — ценный метод установления структуры кортикостероидов, так же как и других групп стероидных гормонов. Помимо общих литературных источников, приведенных в разд. 2.2.15, привлекает внимание ряд статей, посвященных специально фрагментации недериватизованных кортикостероидов, в основном синтетических аналогов, опубликованных не так давно Тофтом и др. [184, 289, 290].

Очевидно, что при масс-спектроскопической идентификации кортикостероидов после газохроматографического разделения в ионизационную камеру масс-спектрометра вводят дериватизо-ванные соединения. Для дериватизации в большинстве случаев используются 20-метоксим-(11,17)21-триметилсилильные производные (МО-ТМС-производные) * [84, 1836, 230, 231, 285], но предложены и другие соединения, в первую очередь циклические бораты (см. разд. 3.2.6), фрагментационные характеристики которых были тщательно изучены.

* Аксельсон [18] исследовал другие алкоксимные производные и кинетику их взаимопревращений, в том числе производные, содержащие

Для масс-фрагментографического количественного анализа кортикостероидов почти исключительно получают МО-ТМС-производные. Газохроматографическое разделение можно проводить на насадочных колонках, но в последнее время все чаще и чаще используют капиллярную хроматографию в сочетании с масс-спектрометрией (с одно- или многоканальным детектированием). Количественную оценку проводят по молекулярным пикам и (или) по интенсивным пикам с т/е для фрагмента М—31, которые характерны для отщепления метоксигруппы от метоксимной группировки.

Хонор, Шеклетон и др. [147, 148, 226] определяли различные кортикостероиды и метаболиты в моче на ионселективной регистрирующей аппаратуре, используя для их оценки пики фрагментов М+ и [М — 31]+. При определении аллотетрагидроальдо-стерона (содержащего За-оксигруппу) в качестве внутреннего стандарта было взято эпимерное Зр-оксипроизво

страница 92
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
холодильник норд не включается
где можно выпрямить вмятины в автомобиле в г. владивостоке
розенбаум билеты купить
курсы вентиляционщик

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.08.2017)