химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

мазей и масляных растворов [1].

Метод двойного изотопного разбавления раньше был очень популярен в этой области, но в последние годы сообщения о его применении, так же как и для анализа половых гормонов,

поступают редко. Прекрасный обзор, посвященный этому и родственным методам, .был опубликован Бойзеном и сотр. [35]. В нем рассматривается использование стероидов, меченных тритием и "С, в качестве радиоактивных индикаторов и образование га-иодбензолсульфонатов, содержащих либо 35S, либо 1251. В недавно опубликованной статье Мацумото и сотр. [197] описали определение кортикостероидов в плаценте человека с применением тритированных индикаторов и 355-тиосемикарбазида для получения радиоактивных производных по 3-кетогруппе.

Метод конкурирующего связывания белка

Хотя, по литературным данным, радиоиммунный анализ в области кортикостероидов обладает более высокой избирательностью и лучшей чувствительностью, методы конкурирующего связывания белка также нашли широкое применение и применяются до настоящего времени. Большинство опубликованных статей посвящено анализу гидрокортизона в моче [74, 92] и крови [27, 28, 68, 70, 74, 157, 169, 215, 217, 222, 245], но описаны также методы анализа других кортикостероидов, например кортикостерона [139а, 157, 167, 169, 279], дезоксикорти-костерона [157, 169], преднизолона [288, 316] и т. д.

В качестве связывающего белка обычно используют богатые транскортином сыворотки, получаемые из разных источников. Специфичность сильно зависит от источника получения сыворотки. Например, Мэрфи [215] обнаружил, что транскортин лошадей обладает низким сродством к прогестерону; следовательно, при использовании этого связывающего белка мешающее влияние прогестерона ничтожно. При использовании менее избирательных белков мешающего влияния менее полярных стероидов можно избежать путем проведения предварительной экстракции тетрахлоридом углерода [70, 157, 160]. Кортикостероиды обычно экстрагируют дихлорметаном, а во многих случаях анализ можно провести прямо в биологической пробе. Очевидно, что предварительное хроматографирование повышает избирательность метода, но этот прием в повседневной работе используется редко [169, 316]. Хроматографирование, конечно, неизбежно при определении большого числа компонентов. Например, Колановски [169] определял гидрокортизон, его 11-де-зоксианалог и кортикостерон в плазме и моче после экстракции дихлорметаном и разделения методом ТСХ с последующим анализом отдельных фракций методом конкурирующего связывания белка.

Для разделения свободного и связанного кортикостероидов чаще всего используют древесный уголь с нанесенным декстра254 Глава 3

ном, но имеются также сообщения о применении хроматографии на сефадексе [27] или флорисиле [215]. Заслуживает внимания любопытный подход к этой проблеме Мюллера и др. [217]: авторы проводили все стадии анализа (т. е. отделение гидрокортизона от сыворотки, его выделение из комплекса с белком, взаимодействие до установления равновесия со связывающим белком транскортином и разделение связанного и несвязанного гидрокортизона) на колонке, заполненной сефадексом G-10, облегчив тем самым автоматизацию метода.

По методике Тана и др. [286], при определении гидрокортизона в амниотических жидкостях для повышения избирательности проводят экстракцию этилацетатом и хроматографирование на сефадексе LH-20, а процент выделения на этих этапах устанавливают при помощи тритированного гидрокортизона. Стероидом-индикатором, конкурирующим с гидрокортизоном за активные центры белка транскортина плазмы человека, служит тритированный кортикостерон (в присутствии 10—14 нг гидрокортизона степень его связывания изменяется на 50 %). Равновесие устанавливается за 1 ч при 0 °С, после чего добавляют древесный уголь с нанесенным декстраном и разделяют свободный и связанный кортикостерон центрифугированием; в полученной надосадочной жидкости измеряют радиоактивность.

Из статей, цитированных в этом разделе, особого внимания заслуживают те, в которых проводится сравнение метода конкурирующего связывания белка и метода радиоиммунного анализа [74, 157, 288].

Радиоиммунный анализ

Как и в случае половых гормонов (см. разд. 2.2:13), РИА становится одним из важнейших микрометодов определения кортикостероидов в биологических объектах.

Основные положения упомянутого выше раздела почти полностью справедливы и для кортикостероидов, поэтому, не об- • суждая ряд методик, опубликованных между 1977 и 1980 гг. (табл. 3.6), остановимся здесь лишь на некоторых специальных вопросах.

Данные табл. 3.6 показывают, что, несмотря на преимущества 1251, отмеченные работающими с ним исследователями [2, 108], тритированные индикаторы, судя по недавно опубликованным работам, применяются шире (даже шире, чем в области половых гормонов), главным образом благодаря меньшему перекрестному взаимодействию. Последнее утверждение, однако, не бесспорно [240]. Вообще говоря, преимущество методов с использованием в качестве метки 1251, а не SH, связано с преиму-е-* а ч Е h

V 9

страница 90
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить столовый набор приборов
пепсиноген 1 понижен что это значит
ремонт холодильника Liebherr CBNes 5156
aspheric contact lens интернет магазин

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)