химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ие А4- и А''4-3-кетостероидов из растворов при ферментации [8] и контроль стабильности кортикостероидов в лекарственных дозированных формах [176] и биологических объектах [190].

Из других адсорбентов, реже используемых в ТСХ для разделения кортикостероидов, следует упомянуть о применении полиамидных слоев (вместо колонки, заполненной сефадексом LH-20 [259]) и поливинилпирролидонового слоя [194].

Поскольку из всех групп стероидов кортикостероиды наиболее чувствительны к окислению, следует принимать во внимание возможность их разложения вследствие окисления, в частности если действию кислорода воздуха подвергаются небольшие количества вещества в течение длительного времени (например, при авторадиографии). Такое разложение можно

Кортикостероиды 229

Кортикостероиды 231

предотвратить с помощью антиоксидантов, например путем обработки слоя насыщенным этанольным раствором аскорбиновой кислоты [93].

Для проявления пятен можно использовать опрыскивающие реагенты, обычно применяемые в анализе стероидов и перечисленные в разд. 2.2.10, но чаще всего таким реагентом для кортикостероидов (специфичным для восстановления боковой цепи) служит тетразолиевый синий (или другие тетразолиевые реагенты), чувствительность которых можно повысить введением их в слой [308] (химизм реакции обсуждается в разд. 3.2.1).

Количественный анализ

Определение кортикостероидов после разделения методами ТСХ и элюирования пятен — очень широко распространенный прием в фармацевтическом анализе стероидов. В качестве примера можно привести метод УФ-спектрофотометрического определения на основе светопоглощения Д4-3-кетогруппой при 240 нм, опубликованный Мачиочи и Фиотеком [189]. Авторы определяли гидрокортизон в мази, содержащей хлорамфеникол и метилпарабен, после их разделения методами ТСХ на сили-кагеле (дихлорметан—бутанол—ацетон в соотношении 254: 30 : : 14) и элюирования пятен метанолом. Проведение реакции с тетразолиевым синим после ТСХ-разделения и элюирования пятна — один из стандартных методов в фармакопее XX США [299г]. Предварительное разделение методом ТСХ значительно повышает селективность реакции с тетразолиевым синим и позволяет использовать его для изучения устойчивости и определения главных компонентов в присутствии родственных стероидов, как, например, при определении ацетонида флурандренолона (16,17-ацетонида 6а-фтор-116,16а,17,21-тетраокси-4-прегнен-3,20-диона). Бишара и Яковлевич [33] проверяли этим способом чистоту последнего. Хроматографирование и многократное элюирование проводили на пластинке, покрытой силикагелем с добавкой флуоресцентного индикатора; при облучении коротковолновым УФ-излучением по гашению флуоресценции было проведено полуколичественное определение посторонних родственных стероидов (путем визуального сравнения с соответствующими стандартными препаратами). Основное пятно элюиро-вали этанолом и проводили в элюате реакцию с тетразолиевым синим.

Разделение и очистка методом ТСХ перед определением играет важную роль и при анализе биологических объектов. Стадия ТСХ либо является частью сложного подготовительного процесса, либо (в небольшом числе случаев) методика определения достаточно специфична, чтобы ограничиться только одним (или несколькими) разделением в тонких слоях. Примером

232 Глава 3

Кортикостероиды 233

может служить определение кортикостероидов в плазме по методу Сейбла-Эмплиса и др. [254], по которому дихлорметано-вый экстракт из плазмы крови подвергают ТСХ с многократным элюированием, а пятно кортикостерона (после проявления парами иода) элюируют метанолом и количественно определяют флуориметрически.

Важной областью применения тонкослойной хроматографии является очистка пробы для последующего РИА или другого варианта метода конкурирующего связывания белка [141, 144, 233]. Специальные проблемы подготовки пробы и источники ошибок разобраны в обзоре Глейспаха [104].

Существуют разные возможности для прямого сканирования in situ тонкослойных хроматограмм кортикостероидов. Первая из них заключается в измерении ослабления интенсивности полосы поглощения при 240 нм ненасыщенной 3-кетогруппы [183а]. Таким путем Каммерль и Мучлер [164] провели определение преднизолона в отдельной таблетке. Тот же прием был успешно использован Поляковым и сотр. [231а] для определения гидрокортизона в сыворотке. Гудел [109] показал, что при исследовании ацетонида флюоцинолона лучше использовать более тонкий слой, чем обычно (0,14 мм), так как при этом можно уменьшить интерференцию, вызываемую поглощением си-ликагеля G при сканировании в относительно коротковолновой области (238 нм).

Другой возможностью использования полосы поглощения при 240 нм является сканирование хроматограмм, основанное на гашении флуоресценции при 254 нм на пластинке, покрытой силикагелем F-254. Сравнивая точность этого метода и УФ-спектрофотометрического метода (с элюированием пятна), Ма-чиочи и Фиотек [189] пришли к выводу, что стандартное отклонение первого метода гораздо выше.

Сканирование хроматограмм можно

страница 85
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
большой стеклянный стол
ортопедическое основание для кровати со складными ножками
купить номерные шторки
нужен склад ответственного хранения

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(30.05.2017)