химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

егда используется для определения глюкокортикоидов в моче и до сих пор остается важнейшим методом анализа биологических объектов.

Хотя при определении конъюгатов в моче метод Портера— Зильбера можно использовать непосредственно без разложения конъюгатов, их обычно гидролизуют в присутствии В-глюкуро-нидазы [94—96, 132, 258, 271а], чтобы получить экстрагируемые свободные кортикостероиды. Экстракция дихлорметаном [94— 96, 300] очень важна, так как позволяет удалить нестероидные хромогенные примеси. Эти примеси можно предварительно экстрагировать петролейным эфиром до экстракции дихлорметаном [90а, 300]. Ферментативный гидролиз и жидкостную экстракцию можно заменить обработкой пробы мочи каолином с последующим связыванием стероидов на колонке, заполненной смолой XAD-2 [14].

Что касается собственно колориметрической реакции, то авторы первоначального варианта методики использовали в качестве растворителя для фенилгидразина (65 мг/100 мл) смесь метанола с водой в соотношении 62:38 (по объему) и проводили реакцию в течение 20 мин при 60 °С, смешивая 8 мл реагента с 1 мл метанольного раствора кортикостероидов [232]. Позднее метанол был заменен этанолом [271] и несколько снижена концентрация серной кислоты (в большинстве методик, рекомендуемых для серийного анализа).

Оптимальная длина волны при измерении около 410 нм. Надежность метода можно повысить, вводя поправку Аллена [14, '94, 300] [см. уравнение (2.8)]. Молярный коэффициент поглощения окрашенного соединения равен примерно 28000. Хотя на практике различные варианты метода дают несколько меньшие значения, чувствительность его достаточно высока, чтобы провести определение глюкокортикоидов в нескольких миллилитрах мочи.

Упомянем, что Хэдд [132] предложил использовать тетра-тидрокортизон-З-В-В-глюкуронид для проверки правильности этого метода при определении конъюгатов кортикостероидов в моче.

Для повышения чувствительности и устойчивости окраски Сангви и сотр. [257, 258] предложили использовать в качестве реагента 4-гидразинбензолсульфокислоту. При взаимодействии ?с этой кислотой в смеси 85 %-ной фосфорной кислоты и воды в соотношении 4:6 (по объему) при нагревании до 100°С в течение 1 ч 17-оксикортикостероиды образуют желтые продукты (^макс = 355 нм). Благодаря увеличению чувствительности (е = = 32 000) метод можно использовать для определения 17-окси-кортикостероидов не только в моче [258], но и в плазме (2 мл), как это описано Хэддом [133].

Наконец, остается упомянуть, что определениям по методу Портера—Зильбера мешают различные лекарственные препараты или их метаболиты: карбамазепин [13], эритромицин, фе-назопиридин, манделат метенамина [95], ацетилспирамицин, лейкомицин, триацетилолеандромицин, рифампицин и хлорпро-мазин [94]. Автор этих последних статей Фуруйя предложил устранять мешающее влияние этих веществ путем обработки пробы гидросульфитом натрия после ферментативного гидролиза до экстракции дихлорметаном.

Другие методы

Важное значение имеют также методы, основанные на реакциях боковой цепи кортикостероидов, которые можно считать вариантами двух основных методов фотометрического анализа кортикостероидов — тетразолиевого и Портера—Зильбера. Лью-барт и Мэттокс [177] предложили проводить окисление боковой цепи (как 17-окси-, так и 17-дезоксипроизводных) ацетатом меди(П) до 20-кето-21-альдегида, который вступает в реакцию конденсации с фенилгидразином в более мягких условиях (без нагревания), чем рекомендуемые в первоначальной методике Портера—Зильбера. Хотя метод Льюбарта—Мэттокса был разработан для анализа биологических объектов, в дальнейшем принцип, положенный в его основу, был использован главным образом для анализа лекарственных препаратов, как это показано в табл. 3.1.

Приведенные в таблице данные показывают, что селективность методов анализа можно обеспечить правильным выбором реагента и условий реакции. Например, при проведении реакции Портера—Зильбера в жестких условиях 21-эфиры кортикостероидов подвергаются гидролизу, и, таким образом, можно определить суммарное содержание эфира и свободного спирта. Однако на основе вышеописанного принципа возможно селективное определение даже 0,1 % 21-оксигруппы в присутствии эфиров [118]. Если в качестве окислителя использовать ацетат ртути(П), то можно избирательно определить 21-амино-кортикостероиды, поскольку этот реагент не взаимодействует с 21-оксикортикостероидами [117]*.

Для одновременного определения 17-валерата бетаметазона и продуктов его расщепления разработан дифференциальный кинетический метод [134в], основанный на разной скорости

216 Глава 3

Кортикостероиды 217

218 Глава 3

конденсации 20-кето-21-альдегидов с гидразоном 3-метилбенз-тиазол-2-она, в котором использованы условия фотометрической методики Бундгаарда и Хансена [43а, 134а] (см. табл. 3.1).

Колориметрический метод определения кортикостероидов, основанный на отщеплении боковой цепи при действии сильных окислителей и измерении количеств образующихся при этом формальдегида или 17-кетогруппы (метод

страница 80
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Погружные вибрационные насосы Малыш
кроссовки мизуно
Распродажа Staub
купить заготовку саней деда мороза

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.02.2017)