химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ний в организме. Благодаря огромному значению этих данных для диагностики анализ стероидных гормонов в биологических объектах стал одним из самых распространенных клинических серийных тестов.

Чаще всего на содержание стероидов исследуются моча и плазма или сыворотка крови, но имеется много сведений и об анализе других объектов, например тканей, фекалий, амниоти-ческих жидкостей и т. п.

Подавляющее большинство стероидов в моче и их значительная часть в крови находятся в виде конъюгатов, поэтому возможны различные подходы к задаче их обнаружения:

а) определение только свободного стероида;

б) определение стероида в свободном и связанном состоянии по отдельности после соответствующего разделения;

в) определение суммарного содержания свободной и связанной форм стероида после переведения последнего в свободный

стероид.

168 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 169

Решение сложных проблем (а) и (б) стало возможным только благодаря введению изощренных методов разделения (в основном хроматографических). В общем можно утверждать, что если в фармацевтическом анализе стероидов большая часть работы приходится на само количественное определение, то в биоклиническом анализе стероидов основное время и труд уходят на процессы разделения и очистки.

Экстракция

В этом разделе термин «экстракция» используется в классическом смысле, поскольку обсуждаться будет только экстракция растворителями; выделение стероидов из растворов методами колоночной хроматографии, главным образом на смоле марки XAD, часто трактуемое в литературе как экстракция, будут обсуждаться в следующем разделе.

Большинство аналитических методов определения стероидных гормонов в биологических объектах включает по крайней мере одну стадию экстракции. Эта стадия проводится либо непосредственно с депротеинизированной пробой, либо чаще всего после расщепления конъюгатов. Обычно для экстракции стероидов с последующим анализом методами ГЖХ, ВЭЖХ, МС, РИА и др. используют диэтиловый эфир [20, 54, 57, 90, 197, 236, 237, 239, 338, 469, 591, 604, 617, 685, 750].

Если цель анализа заключается в определении нейтральных стероидов, эфирные экстракты часто промывают 0,1—2,5 М водным раствором гидроксида натрия для удаления мешающих веществ кислотного характера.

Если же цель анализа —определение эстрогенов, их экстрагируют из эфирного раствора. Например, при определении эстриола в моче эфирный раствор обрабатывают 1 М раствором гидроксида натрия, рН экстракта понижают при помощи гидрокарбоната натрия и экстрагируют эстриол толуолом для последующего газохроматографического определения [557].

Используются также и другие органические растворители:, дихлорметан [88, 266, 589, 629, 723, 724], хлороформ [567, 790], дихлорэтан [778], трихлорэтилен [153], толуол [486], этилацетат [68, 94, 264, 275, 713] и смеси растворителей, например этилацетат—гексан—этанол (7:2:1) [5, 6], диэтиловый эфир-хлороформ (4:1) [653] и т. п.

Конъюгаты экстрагируют более полярными растворителями или смесями растворителей либо уменьшают их растворимость в водной фазе, добавляя большие количества солей типа сульфата аммония [615].

Следует заметить, что многие методики включают более одной стадии экстракции. Например, после выпаривания досуха эфирного экстракта остаток часто распределяют между 70%-ным метанолом и гексаном [750] или между этанолом и петро-лейным эфиром [90] с тем, чтобы отделить холестерин и другие липиды, переходящие в углеводородную фазу, от более полярных стероидов, остающихся в спиртовой фазе.

Хроматографическое разделение и очистка экстрактов

Избирательность количественного измерения на заключительной стадии анализа часто недостаточно высока для селективного определения малых количеств стероидов в биологических образцах с использованием только стадий экстракции. В таких случаях в методики включают стадии разделения и очистки методами колоночной и(или) тонкослойной хроматографии.

Почти все методы колоночной хроматографии, описанные в разд. 2.2.9, широко применяются для анализа биологических объектов (за исключением распределительной жидкостной хроматографии, которая в настоящее время используется в основном в фармацевтике). Для прямого внделения стероидов («экстракции») из разбавленных биологических жидкостей часто применяют колонку, заполненную амберлитом XAD-2; для этой же цели используется кизельгур [825]. Для очистки экстрактов обычно служат колонки с силикагелем и оксидом алюминия, а для фракционирования стероидов в основном используются различные сефадексы (главным образом LH-20). Следует заметить, что колоночная хроматография имеет значение для разделения и очистки не только природных стероидов, но и их производных. Например, Адлеркройц и Шауман [21] перед стадиями силилирования и газохроматографического количественного определения проводили очистку стероидов на колонке, заполненной оксидом алюминия, после их превращения в мето-ксимы. Бауман и Нони [96] очищали пентафторпропионат эстрадиола перед газохроматографическим анализом

страница 56
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Dell Inspiron 3168-5407
деревянные ячейки для хранения вещей в магазинах
сергей жуков билеты на концерт
v54501-s10-a1

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(20.10.2017)