химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

связанного антигена с антителом метят с помощью пероксидазы на двух последующих стадиях. Определение основано на измерении активности связанной пероксидазы (о-дианизидин и пероксид водорода, 400 нм), которая обратно пропорциональна концентрации тестостерона в пробе.

Коэн и сотр. [471, 472] предложили гомогенный метод определения эстриола, основанный на циклической ферментной системе; эстриол участвует в образовании соединения, в котором он посредством 6-карбоксиметоксима ковалентно связан с нико-тинамид-6- (2-аминоэтиламино) пуриндинуклеотидом (эстриол— АЭНАД):

1. Эстриол-АЭНАД + этанол »лк°г°льдегидрогенМа ,

(2.22)

—эстриол—АЭНАДН + Н+ + уксусный альдегид 2. Эстриол-АЭНАДН + оксалилацетат »"»тдегндрога.м._> —эстриол—АЭНАД + малат

Гемисукаинат Т1а-оксипро-гешерона

\Проби плазмы I

Экстракиия петролейным эфиром

Конъюгат пероксидазы хрена

Конъюгат альбумина бычьей сыворотки

[ Выпаривание |

Фосфатный буферный солевой раствор, рн 7,

ЧОмцн, &Q°Q

Альбумин бычьей сыворотки

Рис. 2.21. Схема определения прогестерона в плазме методом иммунофер-ментного анализа по Джойсу и др. [426].

После проведенного цикла количество малата измеряют путем флуориметрирования НАДФН, образующейся в следующей индикаторной реакции:

малат + НАДФ+ малилфермент , пируват4-С0.,4-НАДФН+Н+ (2.23)

Образование малата специфически ингибируется антисывороткой к эстриолу, а это ингибирующее действие подавляется определяемым эстриолом в конкурирующей реакции за антисыворотку между эстриол—АЭНАД и свободным эстриолом. Большим достоинством этого и аналогичных гомогенных методов является исключение операции разделения фаз.

Если сравнивать иммуноферментный метод анализа стероидных гормонов и метод РИА, то можно сказать, что как по специфичности, так и по чувствительности в оптимальных вариан152 Глава 2

тах (порядка 10 пг в одной пробирке) оба метода равноценны. Хотя продолжительность анализа этим методом несколько больше, его роль в ближайшем будущем несомненно возрастет, особенно в лабораториях, где недоступно сравнительно дорогое оборудование, необходимое для РИА [805].

2.1ЛУ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ И РОДСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ

Общие вопросы

Масс-спектрометрия — один из важнейших методов идентификации стероидов и установления их структуры. Даже поверхностный обзор огромного материала по фрагментированию стероидов и взаимосвязи спектров и структуры вышел бы далеко за рамки этой книги, поэтому здесь будут указаны лишь наиболее важные работы, посвященные этому вопросу [105, 112— 114, 795, 863].

Особенно эффективна масс-спектрометрия в сочетании с газовой хроматографией (хромато-масс-спектрометрия, ХМС), поскольку высокая разрешающая способность газовой хроматографии (особенно капиллярной газовой хроматографии) и высокая селективность масс-спектрометрии создают уникальные возможности для качественного и количественного анализа сложных биологических объектов. Очень часто (помимо обычного количественного анализа при помощи ПИД и ДЭЗ) газовые хроматограммы сканируют по общему ионному току, причем масс-спектрометр служит очень чувствительным газо-хроматографическим детектором. Скоростные сканирующие устройства в современных масс-спектрометрах позволяют одновременно регистрировать масс-спектры индивидуальных пиков. Примерами тому могут служить многие практические приложения газовой хроматографии, описанные в разд. 2.2.11.

В большинстве случаев стероиды в биологических объектах перед газохроматографическим анализом дериватизируют, даже если газовый хроматограф объединен с масс-спектрометром; так же поступают и при прямом масс-спектрометрическом анализе. Как уже указывалось в разд. 2.2.11, чаще всего для дериватизации используют реакции триметилсилилирования, ацетилирования или гептафторбутирилирования оксигрупп и образования метоксимов кетогрупп. Фрагментационные характеристики этих производных тщательно изучены [605, 795].

Приемы дериватизации в масс-спектрометрии и ХМС несколько отличаются от методов дериватизации в газовой хроматографии, где целями ее являются повышение летучести и термической устойчивости, улучшение разделения и возможность использования специфических и чувствительных детекторов.

Т

Г*

—S1 —сн,

сн.

тт-г-п

500

гггп

550

150 200 250 300

600

м-is м

М-57 491

I Г| I I I I | I I I 11 г I 350 400 450

75

СН, СН, I 3 I 3 —Si—С—СН, I I 3

159

777 1Q3 745

сн3 сн3

т

283

| | I

100 750 200

217

50

250

>i I | I I I I | I ) I I т I I I и I I г I [ I I I I |

М-57 543

300 350 400 4 50 500 550 600

IBS

CHj

•1,89 ,

ГТТ+

С

Ы —С —СН,

ji > 11 IT 1 > 1111

M-43 529

9,93 795 -5,96 -3,97 -1,99

150 200 2S0 300 350 400 450 500 550 600

•CHj

283

A ii-CH I N

I M I I | Vl

I I и l Г

,LiiUk.Uj.,.t!i

I I I II I I If I I I I

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 500

m/e

Рис. 2.22. Масс-

страница 50
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
проектирование систем отопления обучение
пружина кручения в дверной ручке купить
сервисное обслуживание vrf систем кондиционирования цена
http://taxiru.ru/laytboks-u/

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(21.11.2017)