химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

трические методы

Почти все методы, включающие колориметрические или флуориметрические измерения, основаны на ферментативных реакциях с участием стероидов, содержащих окси- или кетогруппы,— ферментативном окислении оксигрупп или восстановлении кетогрупп. Хотя эти методы обладают более высокой избирательностью, чем классические колориметрические и флуориметрические методы, они не играют такой же важной роли в анализе половых гормонов, как при определении холестерина и желчных кислот. Поэтому более подробно реакции, включенные в эту книгу, обсуждаются в разд. 4.2.9 и 6.2.7.

10 Заказ М> 182

146 Глава 2

В табл. 2.18 приведены некоторые из этих методов (дополненные методами газовой хроматографии и методами, сочетающими бумажную хроматографию и радиоанализ).

Эстрадиол

НАД (|0"J м)

НАДФ (Ю-6 М)

Из методов, приведенных в табл. 2.18, особого внимания заслуживают методы [14, 344, 691], основанные на циклической ферментной системе [616]. В этих методах ферментативная окислительно-восстановительная реакция сочетается с другой

НАДН

1 НАДФН

Эстрон

Глюкоза-Б-фосахкп <Ю"3 М)

Глкжоналпктон-б-Фосфагп

Глюкоза-б-фосфат-дегидрогеназа Эстрадиол-дегидрогеназа (эстрон-эстрадиол- трансгидрогеназа)

Рис. 2.20. Схема реакций циклической ферментной системы при определении эстрона и эстрадиола в моче и плазме [591].

ферментативной окислительно-восстановительной реакцией, образуя циклическую ферментную систему, так что концентрация хромофора или флуорофора зависит не только от концентрации определяемого стероида, но и от времени реакции. При оптимальных экспериментальных условиях можно добиться значительного выигрыша в чувствительности (более чем в 104 раз) и определять пикограммовые количества. Чувствительность ферментативных реакций в этом методе сравнима с чувствительностью радиоиммунных методов анализа. На рис. 2.20, заимствованном из статьи Николаса и сотр. [591], представлена циклическая ферментная система, используемая для определения суммарного содержания эстрона и эстрадиола в плазме и моче.

Если нужно определить только эстрадиол, можно воспользоваться той же реакцией, но блокировать эстрон реакцией с гидразином.

Новым интересным приемом в области ферментативного анализа стероидов является сочетание этого метода с тонкослойной хроматографией, предложенное Ямагучи и др. [853а— 853в]. Ферментативную реакцию проводили на пластинке, а для количественного определения использовали денситометрическое сканирование. Таким путем были определены За-оксистероиды; опрыскивание проводилось реагентом, содержащим За-оксисте10*

о к

Я О

о. я

«О Я

s ч

О "

ЙЧ

+ а в п я о

о

О, И Я S В 3 а я Й в 3 ° л

1ЯВ

Its

Ч Я 7 О Л

ЧЯ

5 Я О 5

О о

Й) Я Ч M

HI Я Я

И Я Я 8"°

ИН П СО CJ К

о5§

V s я со.с(

СИ U Ж

о &

Ц I

53 а>

Т Ч!

, о W и

испол еской емы « S

?•!

О Cl,

« я графи исполь-етеской ггемы о, р к Х

О 9" н SO я g то

тр

М Ч *• Я

3 э « о, * 3 " 3 S я

метр и ци гной пая я иэмер

ОСТИ хро Ш фото

я щ с

к

о

Флуор: зованн фермер а«|

з к В >.я S Ю-6>и Газова s в 3

о к в н « й

111 Спектр 340 нм

х а

СО О

и 2

St

33 О 03 S

о

к S3 g

« t 5Е

sa|

I О S US:

3 a s

о я 3

Я "re"

Ой О I

ills

СО г*

(J

5.

Я Я о. я

s а

m о

Ч s

СО.Я

COO Я CO о,«

ч 5

О Я

QJ О

|8

СО

X SC

я

W20

да

S> о < с

о1 о.

СО Ч СО

S СО

к - г-~

4f я

яг. ЕЙ О.

>х — и

О Ш «• Ч

ОН V

Я VO X

а. о Я

к „ (Ч Q, СИТ SA

ч « ОСА Я

<Х ЖЕ?1 и

148 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 149

роид—оксидазу, диафоразу, НАД и хлорид 2-ге-иодфенил-3-и-нитрофенил-5-фенилтетразолия. Образующийся из последнего соединения формазан сканировали денситометрически при 500 нм [8536, 853в]. Аналогично определяли Зр-оксистероиды при помощи Зр-оксистероид—оксидазы; колориметрическим реагентом служила смесь 4-аминоантипирин—фенол (см. с. 307) [853а].

Радиоферментные методы

Ниже кратко обсуждаются два характерных примера ферментативных методов с использованием радиоизотопов.

Пол и Аксельрод [617] определяли катехолэстрогены (2-оксиэстрон и 2-оксиэстрадиол) в тканях. Экстракты подвергали ферментативному О-метилированию; ферментом служила катехол-О-метилтрансфераза, а донором меченого метила 3H-S-аденозилметионин. Образующееся монометильное производное можно выделить из смеси методом тонкослойной хроматографии и после извлечения из зоны количественно измерить на сцинтилляционном счетчике. Ферментативная реакция чрезвычайно селективна, что позволяет проводить определение даже в присутствии родственных веществ, например эстрона и эстрадиола.

Де Греве и сотр. [178] гидроксилировали 16-тритированный прогестерон или прегненолон по С-16, отгоняли 16а-гидрокси-лазу из инкубационной смеси и измеряли активность 3НгО на жидкостном сцинтилляционном счетчике, определяя таким образом и активность 16а-гидроксилазы.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный метод анализа

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Газовые котлы Protherm Медведь KLOM 20
разделочные доски пластиковые набор
дачные качели купить в спб
хранение мотоцикла цена

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)