химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ль в области анализа сердечных гликозидов, поэтому она будет рассмотрена в разд. 7.2.8. Достоинства и возможности этой реакции для РИА прогестерона обсуждаются Алленом и Ред-шоу [27].

Следует заметить, что один из самых современных методов в аналитической химии стероидов, иммуноферментный анализ, тесно связан с радиоиммунным анализом, но только стероиды мечены ферментами. Однако этот метод будет рассмотрен в разделе, посвященном ферментным методам (разд. 2.2.14), поскольку в нем используется радиоактивность.

в) Подготовка пробы к анализу. Если в анализируемом образце определяется небольшое число стероидов, то растворенную пробу можно исследовать методом РИА без предварительного разделения, как, например, при определении эстриол-16а-глюкуронида в моче беременных [495], прогестерона в плазме кобыл [528] и т. п. Однако гораздо более типична ситуация, когда пробу нужно по крайней мере депротеинизировать метанолом или этанолом или экстрагировать эфиром или другим растворителем *.

Наиболее важный вопрос при подготовке проб для РИА состоит в том, нужна ли или не нужна стадия хроматографиро-вания. На этот вопрос нельзя дать однозначного ответа. В серийном клиническом анализе, где важную роль играют продолжительность анализа и возможность автоматизации, стадию хроматографирования по возможности опускают. Это тесно связано со специфичностью антисыворотки. Если антисыворотка достаточно специфична, проблем не возникает, но в присутствии стероидов или других веществ, способных до некоторой степени к перекрестному взаимодействию, исключить хроматографирование можно только в ущерб специфичности метода. Поэтому стадия тонкослойной или колоночной хроматографии часто предшествует РИА (даже во многих недавно опубликованных методиках), но общая тенденция — это разработка методов без стадии хроматографирования.

138 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 139

В сомнительных случаях следует провести и хроматографи-ческий, и нехроматографический варианты анализа, чтобы проверить правильность определения, как это сделали Канлуан и сотр. [440а] при определении левовращающего норгестрела в плазме. Ими было показано, что при прямом анализе экстрактов петролейным или диэтиловым эфиром результаты на 18 и 37 % выше действительных значений, полученных после хроматографирования.

г) Инкубирование анализируемой пробы с антисывороткой

и меченым стероидом в буферной среде. Равновесие между

меченым и немеченым стероидами на поверхности антитела

устанавливается в буферном растворе (рН обычно между 7 и

8,5) при температуре от 4 до 37°С. В последнем случае равновесие достигается через 1 ч, тогда как при 4°С необходим

несколько более длительный инкубационный период. Наиболее

оптимальными являются следующие условия: выдерживание

в течение ночи при 4°С или 1—2 ч при 37°С *. Поскольку константа устойчивости комплекса стероид—белок зависит от температуры, то, конечно, и чувствительность метода изменяется

с изменением температуры. Это создает сложные проблемы,

особенно в случае иодированных производных, константы

устойчивости которых для меченого и немеченого стероидов

различаются. Детальное обсуждение этой проблемы можно

найти в статьях Коллинза и др. [163] и Хэммонда и др. [335].

Другой важный момент состоит в том, что при анализе совершенно необходимо пользоваться инертными поверхностями. На рис. 2.19, взятом из статьи Фенимора и др. [245], представлена типичная кривая, полученная при анализе прогестерона (зависимость процента связанного меченого стероида от количества добавленного стероида) с использованием стеклянной посуды, дезактивированной классическим способом сили-лирования в жидкой фазе или парами гексаметилдисилазана в газовой фазе. Характер другой кривой, полученной с использованием необработанной посуды, показывает, что измерение распределения радиоактивности не применимо в аналитических . целях вследствие конкуренции между стеклом и антителом за меченый и немеченый прогестерон.

* Поскольку скорость взаимодействия с белком зависит от вида молекул, использование неравновесных методов существенно снижает специфичность определения («первым пришел, первым прореагировал»).

д) Отделение комплекса стероид—антитело от свободного

стероида и измерение радиоактивности. Построение стандартной кривой зависимости процента меченого стероида, связанного с антителом, от концентрации немеченого стероида и определение неизвестной концентрации стероида основано на распределении радиоактивного стероида между антителом и жидкой фазой. Поэтому перед измерением необходимо разделить свободный и связанный стероиды.

Чаще всего для разделения в реакционную смесь добавляют древесный уголь, покрытый декстраном. Он связывает свободный стероид, который можно удалить из смеси центрифугиро 50 45 40 JS63 S о .3 50связанной pai 25-20-75 10-5

1 1 1 1 1

100 200 300 Ш 500

Количество прогестерона, пг

Рис. 2.19. Стандартные кривые радиоиммунного определения прогестерона [245].

1 — стеклянная посуда, силили

страница 45
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
слова благодарности за помошь
http://taxiru.ru/magnitnyie-nakladki/
стикеры на корпус компьютера купить
печать баннера на ткани

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.06.2017)