химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ирующего связывания белка и может считаться его вариантом. В этом методе определение основано на взаимодействии стероид—белок, являющемся взаимодействием типа антиген— антитело, что приводит к значительному улучшению селективности. Сами стероиды не иммуногенны и способны вырабатывать антисыворотку, содержащую специфические антитела, только если связаны ковалентной связью с крупной молекулой белка. Эти антитела способны более или менее избирательно связывать стероид из комплекса с белком, использованного для иммунизации животных, в организме которых вырабатывается антисыворотка. Конкуренция между определяемым стероидом и его меченым аналогом и лежит в основе определения. Теоретические и практические основы этого метода были разработаны более десяти лет назад, но в повседневном клиническом и биохимическом анализе РИА начал широко применяться только в последние пять лет благодаря тому, что несколько предприятий изготовили коммерчески доступные меченые стероиды и антисыворотки, освободив тем самым аналитиков от очень сложной, длительной и трудоемкой работы по получению их в лабораторных условиях, которую им приходилось проделывать в начале развития этого метода.

Важность методов РИА стероидов нашло отражение в том, что, несмотря на короткий срок, прошедший с начала распространения этого метода на химию стероидов, уже опубликованы монографии, посвященные этому вопросу [122, 324, 418а], а в общих монографиях имеются специальные главы, как, например, в книге под редакцией Пастернака [613]. Из нескольких обзорных статей упомянем лишь самую последнюю, написанную Праттом [644], в которой приведено не менее 266 ссылок на статьи, посвященные методам РИА стероидов.

Далее рассмотрим главные особенности метода в последовательности, отвечающей основным стадиям анализа.

а) Получение антисыворотки, содержащей специфические антитела. Хотя в настоящее время их в большом ассортименте изготовляет промышленность, а теоретические аспекты этой проблемы выходят за рамки данной книги, все же этот вопрос следует кратко обсудить, поскольку дальнейшее развитие метода, т. е. повышение его специфичности, тесно связано с этой стадией [71, 227].

Первый шаг в получении антисыворотки состоит в подготовке иммуногенного комплекса стероид—белок, для чего надо синтезировать производные стероидов, которые подвергаются ковалентному связыванию с белком. В большинстве случаев в качестве мостиков используют бифункциональную молекулу. В случае 3- или 17-оксигрупп обычно получают гемисукцинаты [483, 713], а 3-, 17- или 20-кетоны превращают в О-карбокси-метоксимы [57, 67, 151, 167, 168, 335, 338, 414, 687, 689, 716, 769, 813]. Эстрогены с фенольной группой можно перевести в З-О-карбоксиметиловые эфиры [654] и т. п. Более высокой избирательности можно добиться, если присоединить мостико-вую молекулу к углеродному атому скелета, не содержащего первоначально никакой функциональной группы (О-карбокси-метоксимы 6- или 7-кетопроизводных 4-ен-З-кетонов или эстрогенов [37, 182, 263, 335, 654, 858], 11-сукциноилоксипроизвод-ные тестостерона и прогестерона [67, 335, 493, 538, 704] или О-карбоксиметиловые эфиры, например в положении 19 [655]).

136 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 137

Для эстрогенов недавно открыты новые возможности, заключающиеся в связывании их с белком через 6-сукцинилоксимо-стик [581в], образовании метиленового мостика при С-2 или С-4 путем реакции Манниха с формальдегидом [581а, б, 599а], а также в использовании других реакций, например диазосоче-тания или нитрования ароматического кольца [581а, б, 599а].

Свободные карбоксильные группы этих производных сочетают с аминогруппой белка-носителя [в большинстве случаев с е-аминогруппой лизина в бычьем сывороточном альбумине (БСА)] стандартными методами химии пептидов.

Полученный таким образом комплекс стероид—белок вводят (вместе с различными адъювантами) в организм подходящих животных (чаще всего кроликов) для получения антисыворотки, содержащей специфические антитела. Специфичность какой-либо антисыворотки можно охарактеризовать данными о перекрестном взаимодействии с родственными соединениями. Например, если антисыворотка для определения тестостерона выработана при помощи З-О-карбоксиметоксима, перекрестное взаимодействие с эпитестостероном составляет 0,3 %, а для 5а-дигидротестостерона эта величина достигает 65 % [369], однако если для иммунизации применить 66-карбоксиметиловое производное тестостерона, то последнюю величину можно понизить до 0,8% [781]*.

б) Получение меченых стероидов. В настоящее время выпускается большое число меченых стероидов, пригодных непосредственно для радиоиммунных определений, в основном стероиды, меченные тритием, большое достоинство которых состоит в том, что одно и то же производное можно использовать и для контроля за полнотой отделения стероида, и для радиоиммунного определения. Кроме того, возможно использование 1251-меченых производных [122, 207, 335, 414, 439, 500, 590, 704, 813]. Дериватизация играет первостепенную ро

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ноутбук в аренду москва
Рекомендуем фирму Ренесанс - лестница на второй этаж в частном доме - цена ниже, качество выше!
столик изо купить
Компьютерная фирма КНС Нева предлагает онлайн кредит на технику - Санкт-Петербург, ул. Рузовская, д.11, тел. (812) 490-61-55.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)