химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

оматографии и добавляют индивидуальные радиоактивные индикаторы к соответствующим фракциям). Затем пробу или фракции обрабатывают меченым реагентом, который вводит в молекулу (молекулы) вторую радиоактивную метку. После хроматографического разделения де-риватизированных стероидов в соответствующих фракциях подсчитывают радиоактивные сигналы от обоих видов меток и по соотношению двух радиоактивностей рассчитывают концентрацию каждого стероида (при помощи соотношений, полученных на стандартных образцах).

В исчерпывающем обзоре Фишман [250] рассмотрел применение метода двойного изотопного разбавления для определения эстрогенов в моче. В большинстве опубликованных методик в качестве радиоактивных индикаторов рекомендуются тритированные эстрогены, а в качестве реакции дериватизации — ацетилирование 14С-уксусным ангидридом. Аналогичная методика предложена для определения За,17<х,20а-триокси-5р-прегнан-11-она в моче [490]. Тритированное производное (см. выше) добавляют к экстракту и проводят реакцию ацетилирова-ния во фракции, полученной при разделении на колонке или на бумаге, с помощью 14С-уксусного ангидрида; раствор после ацетилирования очищают методом ТСХ. Зону, содержащую соответствующую фракцию, помечают при помощи красителя, элюируют стероид и определяют соотношение 3Н/14С на жидко» стном сцинтилляционном счетчике.

Метод конкурирующего связывания белка

Методы, основанные на конкуренции между мечеными и немечеными молекулами стероида за активные центры белка, более чувствительны и менее трудоемки, чем «классические» радиоизотопные методы, и в то же время достаточно специфичны. Особенно высокими специфичностью и чувствительностью отличаются те методы, в которых связывание белка происходит не в результате простой адсорбции, а в результате взаимодействия антитело—антиген. Этим (радиоиммунным) методам обычно отдается предпочтение перед методами конкурирующего связывания белка во всех случаях, когда удается получить достаточно селективную антисыворотку. Поэтому метод конкурирующего связывания белка имеет первостепенное значение в тех ситуациях, когда неприменимы радиоиммунные методы, т. е. при анализе витаминов D и их гидроксилированных метаболитов. Вот почему более подробно этот метод обсуждается в разд. 5.2.10, а здесь приведены лишь отдельные примеры его использования, которые можно рассматривать как дополнительные методы определения (помимо радиоиммунных).

Хорган и Райли [379] описали метод определения тестостерона в плазме, в котором в качестве источника белка используется сыворотка крови женщин на поздней стадии беременности. Для контроля за полнотой разделения на колонке с обращенной фазой (целит 545, покрытый 1,2-этандиолом) использовали тритированный тестостерон, он же служил для конкуренции с тестостероном пробы плазмы, а также со стандартным тестостероном при построении градуировочной кривой (зависимость соотношения связанной и свободной радиоактивности от концентрации тестостерона). При рН 7,4 равновесие устанавливается в течение ночи; свободный и связанный тестостерон разделяли центрифугированием после осаждения комплекса белка сульфатом аммония. Радиоактивность измеряли в надосадочной жидкости на сцинтилляционном счетчике.

Аналогичную методику предложили Дессиприс и др. [186, 187]. Ее особенностью является то, что для проверки полноты выделения на стадиях экстракции и хроматографической очистки к раствору добавляли тритированный эпитестостерон; его поведение в процессе определения, в том числе и при хромато-графировании на оксиде алюминия, аналогично поведению тестостерона, но способность к связыванию белка, используемого в методе, ничтожна, поэтому он не мешает конкуренции между тестостероном и тритированный тестостероном.

По методике Юлеша и др. [429], тестостерон в сыворотке крови определяют после экстракции, двух разделений методом ТСХ и хроматографирования на флорисиле; в качестве связывающего белка использована сыворотка крови женщин на поздней стадии беременности. Свободный 3Н-тестостерон в отличие от связанного адсорбируется на флорисиле.

134 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 135

Сравнение метода конкурирующего связывания белка и радиоиммунного метода при определении прогестерона в плазме, проведенное в работах [62, 820], позволило сделать заключение, что оба метода одинаково эффективны. Заслуживает упоминания работа Батры [62], разделившего свободный и связанный белком тестостерон путем адсорбции первого на ротационном фильтре дискового типа из нитрата целлюлозы и определения несвязанного меченого тестостерона в фильтрате. Вайхенберг с сотр. [820] обнаружили, что надежные достоверные результаты в обоих методах можно получить только в том случае, если перед измерением активности провести разделение методом ТСХ.

Аналогичные методики предложены для определения субна-нограммовых количеств других стероидных гормонов: этинилэстрадиола [806], 17-оксипрогестерона [758] и т. п.

Радиоиммунный метод

Радиоиммунный анализ (РИА) тесно связан с методом конкур

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
мебель фабрика линеатре модель элеганс для ванной
дизайнерская программа корал обучение м беляево
услуга, пьяный водитель
дверные ручки renz

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)