химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

, приведет к возрастанию роли ВЭЖХ в тех областях биомедицинского анализа, где чувствительность этого метода пока недостаточна.

Наконец, следует заметить, что в последние несколько лет возросла роль высокоэффективной жидкостной хроматографии как метода предварительного разделения. Например, Герман-сон [365а] описал газохроматографическое определение глю-куронидов стероидов после разделения ВЭЖХ. Шёнёсхофер и др. [696а] сообщили об использовании ВЭЖХ для предварительной очистки при радиоиммунном определении прегнено-лона и 17-оксипрегненолона.

2.2.13. РАДИОИММУННЫЙ

И ДРУГИЕ РАДИОИЗОТОПНЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА

Методы с использованием стероидов, меченных радиоизотопами, находят широкое применение для определения стероидных гормонов в биологических объектах. Такое положение существовало уже 20—25 лет назад, но недавно роль радиоизотопных методов возросла благодаря развитию и быстрому распространению методов связывания белка (в основном радиоиммунных). Это привело одновременно к снижению роли «классических» радиоизотопных методов. Поэтому огромный материал, опубликованный по этим вопросам, будет обсуждаться очень кратко и больше внимания будет уделено современным методам.

Метод радиоактивных индикаторов

Контроль за полнотой разделения и экстракции — область, в которой метод с использованием меченых стероидов до сих пор остается незаменимым. Из многочисленных работ, посвященных этому вопросу, здесь будет представлено лишь несколько типичных примеров. Фейркло и др. [230] исследовали разделение стероидов на колонках, заполненных липидексом. Степень разделения контролировалась по радиоактивности

Половые гормоны и родственные соединения 131

фракций с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Стероидами, применяемыми в этих исследованиях, были [ 1 а,2а-3Н] -прогестерон, [4-14С] -тестостерон, [4-мС]-дегидроэпи-андростерон, [6,7-3Н]-эстрон и т. п., а радиоактивность колебалась в интервале 10—58 Ки/ммоль.

Хороший пример применения радиоизотопов для исследования метаболизма приведен в статье Матсуи и др. [529]. Авторы изучали продукты обмена тестостерона и 17-сульфата тестостерона, выделяющиеся с желчью у крысы, с помощью 4-14С- и 7-3Н-производных соответственно. Гидроксилированные и конъюгированные продукты обмена разделяли методом колоночной хроматографии на сефадексе LH-20 и амберлите XAD-2. После сольволиза полученных конъюгатов свободные стероиды разделяли методом ТСХ; продукты обмена определяли при помощи автосканирующего устройства и измеряли активность на жидкостном сцинтилляционном счетчике после элюирования из соскобленных пятен. Если стероид, который необходимо определить в сложных биологических образцах, имеется в меченой форме, его нужно добавить к экстракту, чтобы затем обнаружить фракцию, содержащую искомый стероид, и количественно определить его каким-либо аналитическим методом.

При анализе сложных биологических объектов в несколько стадий экстракции и колоночной или тонкослойной хроматографии необходимо контролировать полноту выделения на каждой стадии и для всего разделения в целом как в процессе разработки методики, так и при серийных определениях. Легче всего это сделать, добавляя к пробе меченое производное определяемого стероида и прослеживая его путь через все стадии разделения. При помощи поправочного коэффициента, полученного тем же способом, можно учесть потери в процессе отделения и очистки. Например, Лауд и сотр. [490] определили За,17а,20а-триокси-5(5-прегнан-1 Гон в моче методами газовой хроматографии и двойного изотопного разбавления. Аналитическому измерению предшествовали стадии ферментативного гидролиза, экстракции эфиром, промывания экстрактов 0,1 М раствором гидроксида натрия и водой, хроматографирования на колонке и две стадии очистки методом бумажной хроматографии. Предварительно необходимо синтезировать меченные тритием производные стероидов (восстановлением три-тированным борогидридом натрия соответствующих 20-кетопро-изводных с последующим разделением эпимеров методом колоночной хроматографии). Добавляя это производное в качестве радиоактивного индикатора к пробе до экстракции, можно установить положение стероида на хроматограммах и внести поправку на потери в процессе работы.

9*

132 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 133

Метод двойного изотопного разбавления

Это один из наиболее эффективных методов определения стероидов в биологических объектах. Самое большое достоинство его — высокая специфичность. Однако чувствительность этого метода гораздо ниже чувствительности вытеснивших его методов, которые будут обсуждаться ниже. Недостаточно высокая чувствительность, а также длительность и трудоемкость операций значительно снижают значение метода двойного изотопного разбавления, в связи с чем новые публикации появляются нечасто.

Принцип этого метода заключается в следующем. Если требуется определить стероиды А, Б и В, то к пробе добавляют меченые А, Б и В (или смесь разделяют на фракции методами тонкослойной или колоночной хр

страница 42
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
вр-пр 600х600
стикеры mass effect купить
японские кроссовки mizuno
офтальмикс profi

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.08.2017)