химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

чувствительность количественного определения. Хотя этому вопросу посвящено огромное число работ, можно утверждать, что дериватизация в ВЭЖХ имеет гораздо меньшее значение, чем в газохроматографическом анализе стероидных гормонов.

В большинстве случаев дериватизацию проводят перед введением в колонку, т. е. дериватизации подвергается разделяемая смесь и фактически разделяют производные [253, 254, 364, 671, 673, 692]. Однако описана также дериватизация разделенных компонентов, которую проводят в элюате после выхода его из колонки перед флуориметрическим детектированием [381, 382].

Первой для разделения и количественного определения методом ВЭЖХ была использована классическая колориметрическая реакция получения производных кетостероидов — их 2,4-динитрофенилгидразонов (работа Генри и сотр. [364]). Затем Фитцпатрик и др. [253] применили этот метод для определения андростерона и родственных веществ, а Рус [671] — для определения конъюгатов и этерифицированных эстрогенов в лекарственных формах. Хотя при анализе хроматограмм с помощью одноволнового УФ-детектора (при 254 нм) существенно повышается чувствительность [364], измерение в более длинноволновой области селективнее (например, при 365 нм [671]). Повышение чувствительности позволяет снизить предел обнаружения до 1 нг. Разделение динитрофенилпроизводных проходит почти так же, как и разделение исходных стероидов, что характерно и для других производных, описанных в этом разделе. Используя л-нитрофенилгидразин в качестве реагента для дериватизации и электрохимический детектор, Шимада и др. [713в] добились еще более высокой чувствительности (200 пг).

На распределительных хроматографических колонках [253, 364, 671] для динитрофенилгидразонов индивидуальных стероидов (в том числе 4-ен-З-кетостероидов) получены хромато-граммы с единичными симметричными пиками. Однако при использовании для разделения адсорбционных хроматографических колонок и различных элюентов эти пики расщепляются на два, соответствующие син- и а«г«-изомерам динитрофенилгидразонов 4-ен-З-кетонов [308]. На рис. 2.17 это явление иллюстрируется на примере соответствующих производных прогестерона *.

Кавасаки и др. [445а] описали дериватизацию кетостероидов дансилгидразином для их флуориметрического обнаружения (возбуждение при 350 нм, испускание при 505 нм).

126 Главе 2

Половые гормоны и родственные соединения 127

га 8

6 4 Время, мин

РИС. 2.17. Разделение сим- и акти-изомеров бис(динитрофе-нилгидразонов) прогестерона методом ВЭЖХ на колонке с партисилом PXS-10 при элюирования смесью цнклогексан— дихлорметан (2:3); УФ-детек-тор на 254 нм [308].

Другой функциональной группой, удобной для дериватизации в методе ВЭЖХ, является оксигруппа. Фитцпатрик и Сиг-гиа [254] предложили метод бензо-илирования бензоилхлоридом в пиридине с последующим разделением бензоатов стероидов экстракцией эфиром после разрушения избытка реагента. Благодаря интенсивной полосе поглощения при 230 нм чувствительность обнаружения этих бензоатов, а также их разделение достаточно удовлетворительные. Например, за 12 мин можно разделить прегненолон и ал-лопрегнанолон в виде их бензоатов на колонках с обращенной фазой (пермафаза ODS) путем вымывания смесью метанола и воды (2:1). Несмотря на эти достоинства, бен-зоилирование, по-видимому, не получит широкого распространения в ВЭЖХ стероидных гормонов. То же справедливо и в отношении других возможных способов дериватизации при проведении ВЭЖХ стероидных гормонов, таких, как образование 2,6-динитрофенилгидразона пирувоилового эфира или я-иодбен-золсульфонилового эфира [671]. Однако следует заметить, что п-нитро-бензоилирование, также упоминаемое в статье Фитцпатрика и Сиггиа [254], оказалось чрезвычайно полезным в ВЭЖХ сердечных гликозидов (см. разд. 7.2.7).

Росс [673, 673в] и Шмидт с сотр. [692] почти одновременно опубликовали метод определения эстрогенов с использованием ВЭЖХ, основанный на образовании дансилпро-изводных (см. разд. 2.2.10) и отличающийся высокими селективностью и чувствительностью. Дан-силхлорид в ацетоне в присутствии водного карбоната натрия легко дансилирует фенольную группу эстрогенов, причем данси-лированные эстрогены можно вводить в хроматограф после экстракции [673] их из реакционной смеси или без экстракции

[692]. Разделение дансилированных эстрогенов и отделение их от других недансилированных стероидов проходят одинаково эффективно как на силикагеле [673], так и на распределительных колонках с обращенной фазой [692]. Даже при расшифровке хроматограммы с помощью УФ-детектора при 350 нм чувствительность обнаружения гораздо выше, чем для исходных стероидов, а использование флуоресцентных детекторов (возбуждение при 350 нм, испускание при 540 нм) позволяет снизить предел обнаружения до 10 пг. Благодаря реакции дансилирова-ния этот метод можно использовать для решения сложных задач анализа эстрогенов: для определения эстрогенов в лекарственных формах, например этинилэстрадиола в противозачаточных таблетках [673], и обнаружения эстриола

страница 40
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить жесткий диск seagate
http://help-holodilnik.ru/Remont_xolodilnikov_v_Taganskom
автобусы на 60 мест
щелкающий палец или стенозирующий лигаментит

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(12.12.2017)