химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

оторых дан в монографиях, перечисленных во введении к этому разделу, а также в других книгах.

При анализе биохимических образцов положение пятен чаще всего устанавливают при помощи радиоактивных меток, используя авторадиографию или прямое сканирование. Важное преимущество этого метода состоит в том, что он позволяет одновременно оценивать полноту выделения стероидов. Для обнаружения пятен при анализе стероидов, поглощающих УФ-излу-чение, обычно применяют другой прием, который основан на появлении темных пятен при облучении УФ-светом (254 нм) пластинки, покрытой тонким флуоресцирующим слоем. Некоторые методы обнаружения пятен связаны с применением либо нераз-рушающих стероиды реагентов, например паров иода, либо разрушающих реагентов, либо более заметных красителей, наносимых на край пластинки. Для извлечения стероидов из соскобленных с пластинок зон предложены самые разные растворители и их смеси, причем выбор диктуется полярностью исследуемых стероидов.

78 Глава 2

Половые гормоны и родственные соединения 79

Из множества примеров применения метода элюирования пятна в аналитической химии стероидов упомянем лишь некоторые наиболее характерные (в дополнение к разобранным в других разделах этой главы).

Уол и сотр. [821] определяли ацетат тренболона (ацетат 17В-окси-4,9,11-эстратриен-З-она) и этинилэстрадиол в корме для свиней, разделяя экстракт методом ТСХ с последующим элюированием компонентов хлороформом, газохроматографиче-ским разделением и количественным определением. Тренболон и его ацетат определяли также Эрле и др. [600] после хрома-тографирования на силикагеле с помощью системы хлороформ— этилацетат (2:1). Положение пятен определяли визуально в УФ-свете при 366 нм после выдерживания пластинки в парах концентрированной соляной кислоты. Возникающую при этом флуоресценцию можно использовать для полуколичественного определения нанограммовых количеств. Для количественного определения пятна элюируют эфиром, выпаривают досуха и обрабатывают 50 %-ной фосфорной кислотой в метаноле. Флуоресценцию измеряют при 498 нм (возбуждение при 365 нм).

Для определения прегнандиола и прегнантриола в моче Бабьюк и сотр. [50] предложили следующую методику. После ферментативного гидролиза и экстракции хлороформом пробу мочи помещают на пластинку, покрытую силикагелем, устанавливают положение соответствующих зон, опрыскивая край полоски смесью серной кислоты с этанолом, и экстрагируют пятна смесью хлороформа с этанолом (17:3). После выпаривания экстрактов индивидуальные стероиды определяют либо колориметрически с серной кислотой (длина волны 425 и 435 нм соответственно), либо методом газовой хроматографии в виде их триметилсилиловых эфиров.

Особого упоминания заслуживает комбинированный ТСХ — фотометрический метод Хакла [332] определения дегидроэпи-андростерона в моче, поскольку в этом случае образование производных (реакция 17-кетогруппы с 2,4-динитрофенилгидрази-ном) проводится до хроматографирования. Образующиеся гид-разоны хорошо разделяются на силикагелевой пластинке смесью хлороформа с ацетоном (95:5), и после экстракции метанолом диннтрофенилгидразон дегидроэпиандростерона можно непосредственно определить спектрофотометрически.

Тонкослойную хроматографию применяют также при разделении следов примесей в лекарственных веществах для последующего масс-спектрометрического анализа; это было сделано Лоджем и Тофтом [510] при установлении профиля концентраций примесей в норэтистероне и его ацетате.

Количественные методы in situ

Если требования к точности определения позволяют использовать полуколичественные методы, интенсивность пятен часто оценивают визуально путем сравнения со стандартными пятнами или рассчитывают концентрацию компонента по минимальному объему раствора сравнения, которым нужно обработать слой для получения заметного пятна [126].

Гораздо более важной задачей является количественное определение стероидов в тонких слоях in situ. Попытки созда. ния денситометрических методов, не требующих элюирования пятен, предпринимались с первых шагов применения ТСХ в анализе стероидов. Денситометры старых конструкций не обеспечивали требуемой чувствительности и достаточной воспроизводимости, поэтому денситометрия тонких слоев не могла в то время конкурировать с другими количественными хромато-графическими методами (ТСХ с элюированием пятна, газовой хроматографией).

Значительные успехи в совершенствовании аппаратуры в последние несколько лет отразились и на развитии денситометрических методов; наиболее существенными достижениями следует считать следующие:

а) повышение чувствительности почти на два порядка

(в случае высокоэффективной тонкослойной хроматографии

(ВЭТСХ) почти на три порядка);

б) вследствие этого для анализа достаточно очень небольших количеств веществ, благодаря чему легко получить линейные градуировочные графики в нанограммовой области;

в) стероиды, поглощающие свет в УФ-области, можно определить прямым сканированием на УФ-спектроденситометре без

предварительной дериват

страница 25
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
цветы каллы с доставкой купить
Фирма Ренессанс лестница для дачи фото- быстро, качественно, недорого!
кресло для персонала престиж
Удобно приобрести в КНС Нева купить документ-камеру для школы - поставка техники в СПБ и города северо-запада России.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)