химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

игоксиновой терапии. Существует корреляция между кардиотонической активностью этих метаболитов и их связыванием с антителами дигоксина.

Перекрестная реакционноспособность неактивных 20,22-ди-гидрометаболитов варьирует в зависимости от антисыворотки. Следовательно, если необходима селективность дигоксинового РИА по отношению к этому метаболиту, то надо учитывать сродство дигидропроизводного относительно используемой антисыворотки [56, 89, 118] (см. табл. 7.6).

Если для решения специальных проблем антисыворотка нет достаточно селективна, рекомендуется проводить разделение анализируемого гликозида и его метаболитов методом ВЭЖХ [54а, 105а].

В качестве радиоактивных индикаторов пригодны производные, меченные тритием и 1251. Поскольку поглощение В-излучения тритиевых производных часто создает трудности при использова29*

452

Глава 7

Таблица 7.6. Концентрации дигоксина, полученные с помощью дигидродигоксвна с четырьмя серийными наборами для РИА [89]

Сердечные гликозиды 453

упрощается, поскольку исключается стадия центрифугирования. В таком варианте РИА дигоксина легко автоматизировать [21].

Концентрация дегид-родигокснна, ыкг/л

0,4 1,0 2,0 3,0 5,0

0,027

0,036

0,087

0,11

0,18

0,036

0,062

0,15

0,25

0,42

Наблюдаемая концентрация, мкг/л

0,072

0,042

0,13

0,25

0,29

0,27 0,38 0,69 0,95 1,3

нии жидкостных сцинтилляционных счетчиков, то здесь намного чаще, чем в случае стероидных гормонов, применяют производные, меченные i25I, контроль за которыми осуществляется с помощью счетчиков у-излучения . Из производных, содержащих радиоактивный иод, наиболее часто применяют производные тирозина, тирамина, гистамина и т. д., в которых эти аминокислоты или амины связаны непосредственно с 3-окси-группой генинов посредством сукцинильного мостика или с концевой дигитоксозной группировкой сахарного остатка после его активирования путем окисления периодатом или обработки бромцианом [169]. (Эти производные часто используются в РИА стероидных гормонов, причем мостиком служит обычно О-карбоксиметилоксимная группировка.)

Инкубацию метки и антисыворотки с образцом, содержащим определяемый гликозид дигиталиса, выполняют способом, аналогичным описанному в разд. 2.2.13. Следует отметить, что в данном случае время инкубации, как правило, меньше.

Для разделения радиоактивностей, принадлежащих связанной с антителом и свободной меткам, обычно употребляют дре-' весный уголь, пропитанный декстраном [24, 35, 97, 161, 165, 168]. Используют и все другие методы, описанные в разд. 2.2.13 (сульфат аммония [168, 169], полиоксиэтиленгликоль [120, 135] и твердофазные методы [21, 32, 35, 107]). Из этих методов наиболее перспективен последний, особенно когда антитело фиксируется на стенках трубок. В этом случае метод значительно

Чувствительность описанного выше метода достаточна для решения практических задач: он позволяет определять 0,1— 5 нг/мл дигоксина и родственных веществ в 0,1—0,5 мл плазмы крови и т. д.

Ферментный иммуноанализ

Со времени появления ферментного иммуноанализа в биохимическом анализе этот нерадиоактивный вариант РИА вызывает значительный интерес, в том числе для определения дигоксина и родственных веществ, и ему посвящено большое число работ [23, 35, 106, 120, 132, 147]. Ферментный иммуноанализ не имеет никаких преимуществ перед РИА, но, поскольку он дает уникальную возможность определять ультра микроколи454 Глава 7

Сердечные гликозиды 455

чества дигоксина в биологических жидкостях, его можно использовать наряду с РИА, особенно в тех лабораториях, где отсутствует радиоаналитическое оборудование.

Из двух основных вариантов ферментного иммуноанализа наиболее часто используют метод с гомогенной (EMIT) системой [23, 35, 106, 132, 147], основанный на применении кова-лентно связанной с дигоксином глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Этот комплекс катализирует реакцию между глюкозо-6-фосфа-том и НАД с образованием восстановленной формы последнего (НАДН). Содержание НАДН можно определить спектрофото-метрически при 334 нм. Специфическое антитело образует неактивный комплекс с антигенным дигоксин-ферментным производным, и, следовательно, как результат конкурирования дигоксина и дигоксин-ферментного комплекса за активные места антитела активность фермента, представленная поглощением при 334 нм, пропорциональна концентрации дигоксина. Чувствительность и надежность этого метода сравнимы с аналогичными параметрами для стандартных методик РИА.

В другом варианте метода (ELISA) [120] антитело фиксируют на стенке пробирки, а в качестве ферментной метки для дигоксина используют пероксидазу. Субстратом служит 2,2'-азино-бис(З-этилбензотиазолин-б-сульфокислота), которая окисляется с образованием окрашенных соединений. Перед спектрофотометрический измерением цветную реакцию останавливают, добавляя азид натрия.

7.2.9. ДРУГИЕ МЕТОДЫ

Было показано, что ненасыщенная лактонная группа сердечных гликозидов способна восстанавливаться на ртутном капающем электроде. Эти результаты были испо

страница 167
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
колонка с усилителем
оракал купить
подвесные кашпо с автополивом
билеты к киркорову

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(18.01.2017)