химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

итробензоильные производные имеют максимумы поглощения при 260 нм. За исключением стериче-ски экранированных 14-ОН-групп, все оксигруппы стероидных ядер и остатков Сахаров количественно реагируют с л-нитро-бензоилхлоридом. Каждая л-нитробензоилированная окси-группа вносит в суммарный молярный коэффициент поглощения полученного производного приблизительно 14 800. Это означает, что молярный коэффициент поглощения, например дигитоксиге-нина (одна реакционноспособная оксигруппа), равен 14 800, дигоксина (пять реакционноспособных оксигрупп) 73 600 н дез-ацетилланатозида С (восемь реакционноспособных оксигрупп) 118 000. Чувствительность детектирования особенно высока в случае последних производных.

Для проведения дериватизации берут максимум 0,5 мг гли-козида, растворяют в 50 мкл пиридина и обрабатывают 150 мкл 10%-ного (масса/объем) раствора л-нитробензоилхлорида в пиридине в течение 10 мин при комнатной температуре. Растворитель удаляют при 50°С в вакууме водоструйного насоса, а избыток реагента гидролизуют 2 мл 5 %-ного водного раствора карбоната натрия, содержащего 5 мг диметиламинопири-дина. Полученные производные экстрагируют 2 мл хлороформа, экстракт промывают 2 мл раствора гидрокарбоната натрия и

29 Заказ № 182

450 Глааа 7

Сердечные гликозиды 451

затем еще дважды 3 мл 0,05 М соляной кислоты, содержащей 5 % хлорида натрия.

Помимо благоприятного сдвига полосы поглощения и повышения чувствительности детектирования л-нитробензоильное производное обладает отличными хроматографическими свойствами. Это показано на рис. 7.6, где приведены результаты разделения 15 компонентов А-, В-, С-, D- и Е-рядов, осуществленного за 15 мин.

Как и в анализе стероидов других классов, ВЭЖХ становится широко, распространенным методом предварительного разделения дигоксина и его метаболитов перед радиоиммуно-анализом [54а, 105а].

ВЭЖХ пригодна для разделения и количественного определения буфадиенолидов. Шимада и др. [136, 137] разделяли различные агликоны и их конъюгаты на колонке с ц-бондапаком Си при элюировании смесями воды (или водных буферных растворов) метанола и тетрагидрофурана. Для определения буфадиенолидов в лекарственных препаратах Титтель и Вагнер [153а] использовали системы с обращенной фазой.

Гюнтер и др. [70] провели разделение витанолидов на колонке с порасйлом, используя смеси гексана и 2-пропанола или хлороформа и метанола.

7.2.8. РАДИОИММУНОАНАЛИЗ

И ФЕРМЕНТНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ

Радиоиммуноанализ и ферментный иммуноанализ впервые были применены для определения дигоксина в 1969 г. [141] и родственных препаратов в биологических жидких средах в 1975 г. [23]. С этих пор методы иммуноанализа стали стандартными в клиническом анализе. Важную информацию содержат отдельные главы в книге Пастернака [3, 175] и недавно опубликованный обзор Ван-дер-Вига [159].

Радиоиммуноанализ

За немногими исключениями, описанные методы радиоимму-ноанализа (РИА) гликозидов дигиталиса относятся к диго-ксину. Ряд статей посвящен определению дигитоксина [13, 95] и уабаина [161]. Антисыворотка выращивается против комплекса карденолид—альбумин бычьей сыворотки (АБС), получаемого сочетанием 3-оксигруппы агликона или сахарного остатка гликозида с белком через сукцинильный мостик. Полученная таким способом антисыворотка не обладает заметной перекрестной активностью по отношению к стероидным гормонам, присутствующим в сыворотке крови человека. Поэтому в используемой на практике методике РИА не требуется предварительных стадий хроматографического разделения или очистки. В большинстве случаев также не применяется и экстракция (предварительная экстракция этилацетатом для удаления ,примесей, вызывающих неспецифические помехи при определении дигоксина в моче, описана в работе [56]).

Ранее считали, что синтетические стероидные гормоны, спи-«ронолактон и преднизон, реагируют перекрестно. Более поздние исследования показали, что это мнение, вероятно, было вызвано .низкой селективностью антисыворотки, использовавшейся в начальный период развития РИА карденолидов, так как ни спи-Йронолактон, ни преднизон не реагируют перекрестно [32, 107, ?131] и даже их метаболиты не вступают в перекрестные реакции, за исключением тех случаев, когда исходные вещества Даются сверх терапевтической дозы [138,159].

Что касается родственных сердечных гликозидов, то, например, дигитоксин в зависимости от антитела и методики РИА реагирует перекрестно с дигоксином на 5—10 % [32, 107]. С практической точки зрения это не имеет значения, поскольку кровь больных, принимавших дигоксин, обычно не содержит дигитоксина. Аналогичная ситуация наблюдается для ланатозида С, перекрестно реагирующего даже в большей степени. Метаболиты дигоксина (дигоксигенин и его моно- и бис-дигитоксозиды) также вступают в сильное перекрестное взаимодействие [95]. Однако это не вызывает никаких серьезных проблем, поскольку целью клинических исследований уровня дигоксина в сыворотке крови является получение данных по диагностике интоксикации дигоксином для правильного проведения д

страница 166
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
материал для изготовления рекламы
радиаторы стоимость
Двухтопливные котлы De Dietrich GT 430 8
заказ лимузина на др

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)