химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

етилового желтого и метиленового синего.

В монографии Фориста и Джонсона [65] можно найти литературу по применению других классических методов определения желчных кислот.

Баттачария и Банкавала [12] показали, что ЯМР-спектро-скопию можно с успехом применить не только для идентификации желчных кислот, но и одновременно для определения эпимерных желчных кислот, как, например, хенодезоксихолевая и урсодезоксихолевая.

6.3. ПРОБЛЕМЫ АНАЛИЗА ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

6.3.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

И ИХ КОНЪЮГАТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦАХ

Важность определения желчных кислот в биологических образцах возрастает, поскольку эти данные представляют ценность для диагностики желчнопеченочных заболеваний, а также в других областях. Хотя иногда достаточно знать «общее содержание желчных кислот», современные аналитические методы открывают новые возможности для определения главных желчных кислот, их глициновых и тауриновых конъюгатов, а также сульфатов. Подавляющее большинство опубликованных статей посвящено решению именно этих задач анализа желчных кислот.

Колориметрические и флуориметрические методы, основанные на применении сильнокислых хромогенных или флуороген-ных реагентов, обычно позволяют получить данные только об общем содержании желчных кислот. Для повышения селективности этих методов требуется предварительное ТСХ-разделение на индивидуальные компоненты [50, 102]. Хотя селективность многих современных ферментативно-колориметрических и флуо-риметрических методов значительно выше, чем классических, прямым методом можно определить только фракционированные кислоты (За-окси, 7а-оксипроизводные); в этом случае также неизбежно ТСХ-разделение на индивидуальные желчные кислоты [20, 80, 116].

Наиболее широко распространенным методом количественного определения индивидуальных желчных кислот является газовая хроматография, несмотря на то что она имеет ряд недостатков: необходимость двухстадийной дериватизации и очень тщательная хроматографическая очистка анализируемого образца. Главная проблема заключается в том, что этим методом хроматографировать конъюгаты невозможно, и поэтому он непригоден для получения данных по распределению желчных кислот по различным конъюгатам. Кроме того, конъюгаты (глициновые и тауриновые) необходимо подвергать ферментативному гидролизу или гидролизовать нагреванием с гидрокси-дом натрия, тогда как сульфаты [111а, 143, 145] следует подвергать сольволизу, например путем обработки подкисленной смесью этанола и ацетона.

Проблему конъюгатов можно решить с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, пригодной для

27 Заказ № 182

418 Глава 6

Желчные кислоты 419

разделения и количественного определения индивидуальных конъюгатов [135а]. Несмотря на ограниченную чувствительность ВЭЖХ при определении желчных кислот, ее роль в этой области быстро возрастает. В последующие годы можно ожидать дальнейшего развития ВЭЖХ и особенно радиоиммунологического метода — наиболее современного, чувствительного и селективного для определения желчных кислот в сыворотке.

В зависимости от поставленной задачи, природы анализируемого образца и избранного метода анализа перед выполнением количественного определения необходимо осуществить целый ряд предварительных стадий. Прямой анализ без предварительной очистки или разделения возможен только в некоторых радиоиммунных и ферментативных методах [116а, 124, 142]. В большинстве случаев требуются по крайней мере одна или гораздо чаще несколько стадий очистки. Сюда относится осаждение белков (обычно этанолом), гидролиз конъюгатов (если цель анализа не преследует получения данных о концентрации индивидуальных конъюгатов) и отделение желчных кислот от других липидов и т. п. с помощью колоночной или тонкослойной хроматографии.

Гидролиз проводят либо щелочью в очень жестких условиях (например, при нагревании с 1—4 М раствором гидроксида натрия при 110—120°С в течение нескольких часов при повышенном давлении) или ферментативным методом (см. разд. 6.2.7). Хроматографическую очистку или фракционирование образца проводят обычно с помощью комбинированных методов, упоминавшихся в разд. 6.2.3 и 6.2.4, причем наиболее современными являются ионообменная хроматография на амберлите XAD-2 или гель-хроматография на сефадексе.

Ниже кратко описаны две типичные методики определения желчных кислот в сыворотке и желчи.

В методе Росса и др. [155] 6 мкг 7-кетолитохолевой кислоты (внутренний стандарт) добавляют к 0,5—2 мл сыворотки. Белки осаждают 3 мл этанола, центрифугируют и промывают осадок таким же объемом этанола. Из объединенных супернатантов " при длительном охлаждении осаждаются некоторые пептиды. После повторного центрифугирования супернатант осторожно выпаривают досуха и остаток растворяют в 0,1 мл смеси метанола и воды (1 : 1). Затем проводят ферментативный гидролиз конъюгатов, для чего инкубируют водно-метанольный раствор 1 ч при 37°С с 0,8 мл фосфатного буфера (рН 5,5) и 0,3 мл раствора фермента (приготовленного из ацетонового порошка Clostridium

страница 154
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аренда плазм в москве
Компания Ренессанс п-образная лестница на второй этаж - цена ниже, качество выше!
кресло престиж производство
хранение вещей в боксах в московской области

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)