химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ерментативном гидролизе конъюгатов желчных кислот. В разд. 6.2.5 уже упоминалось, что гидролиз необходим, например, при выполнении газохроматографического анализа. Применение холоилглицин-гидролазы позволяет провести гидролиз в очень мягких условиях (рН 5,6, комнатная температура, небольшая продолжительность реакции), что является заметным преимуществом перед обычным щелочным гидролизом [154], требующим более жестких условий.

Матерн и др. [126] применяли ферментативный иммунный метод для определения желчных кислот сыворотки. В качестве ферментативного комплекса использовали холилглицин-перок-сидазу и связанное с сефарозой антитело, обладающее специфичностью относительно свободных и связанных желчных кислот. Определение основано на реакции пероксида водорода с 5-аминосалициловой кислотой, катализируемой пероксидазой (поглощение изменяли при 492 нм).

«.2.8. МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ И РОДСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ

Применению масс-спектрометрии для идентификации желчных кислот посвящены многочисленные статьи и подробные обзоры [33, 52, 171, 172]. Обычно ионизацию осуществляют пучком электронов, но описано также успешное использование и химической ионизации [466, 108а, 175, 181, 183].

При определении желчных кислот в сложных биологических образцах необходимо независимым методом подтвердить данные, полученные с помощью газовой хроматографии (главным образом данные по содержанию минорных компонентов), для чего газовую хроматографию обычно комбинируют с масс-спек-трометрией (ГХ—МС). Во многих газохроматографических методах, обсуждавшихся в разд. 6.2.5, применяется масс-спектро-метрическая идентификация пиков [2, 42, 78, 108, 138, 181].

Масс-спектрометрия как метод количественного анализа также приобрела некоторое значение для определения желчных кислот. При анализе таких сложных смесей, как желчь или другие биологические жидкости, содержащие желчные кислоты вместе с другими липидами, расшифровать газовую хроматограмму иногда трудно даже с помощью масс-фрагментографии с многоканальным детектором. Проблемы расшифровки можно решить, используя подходящий внутренний стандарт и сочетая ГХ—МС с ЭВМ. Таким способом Миязаки и др. [128] идентифицировали и количественно определяли желчные кислоты .и их конъюгаты в желчи. Внутренним стандартом служили дей-терированные желчные кислоты. Образец желчи экстрагировали, проводили гидролитическое удаление сульфогрупп, щелочное гидролитическое расщепление глициновых и тауриновых конъюгатов и получали триметилсилиловые метиловые сложные эфиры . Выделенные фракции исследовали с помощью масс-фрагментографии. Главными фрагментами, используемыми для анализа и вычислений, были ионы с т/е 253, 343 и 368 для хо-левой кислоты, 255, 345, 355 и 370 для дезокси- и хенодезокси-холевой кислот. Эти фрагменты можно получить из триметил-силиловых метиловых сложных эфиров при отщеплении 1, 2 или 3 молекул триметилсиланола и(или) боковой цепи при С-17 и 19-ангулярной метильной группы. Идентификация и количественное определение индивидуальных компонентов в присутствии изомеров и примесей основано на использовании большого различия в относительных интенсивностях упомянутых выше пиков фрагментов, которое можно заложить в ЭВМ перед проведением масс-хроматографического исследования.

Дейтерированная хенодезоксихолевая кислота служила внутренним стандартом при определении желчных кислот сыворотки в виде триметилсилиловых метиловых сложных эфиров с помощью газовой хроматографии на капиллярной колонке по методу Карлаганиса и др. [99а].

Другой интересный метод решения указанной выше проблемы описан Иноу и др. [92]. Образец, содержащий смесь желчных кислот, метилируют смесью метанола и полностью дейте-рированного метанола (1:1), а затем силилируют обычным способом. Желчные кислоты проявляются в масс-спектрах в виде дублетов равной интенсивности, отличающихся на 3 массовые единицы (заметного изотопного эффекта в реакции этерифика-ции не обнаружено). При использовании этих дублетов для

414 Глава 6

Желчные кислоты 415

идентификации и количественного определения мешающее влияние примесей легко устраняется. Очевидно, в тех случаях, когда боковая цепь при С-17, содержащая сложноэфирную группу, остается нетронутой, можно использовать только эти пики. Например, для холевой кислоты такие дублеты наблюдаются при т/е 623 — 626, 458 — 461 и 368 —371, и они соответствуют фрагментам, образующимся из трис(триметилсилил)метилхо-лата при отщеплении 19-метильной группы и 2 или 3 молей триметилсиланола соответственно.

Желчные кислоты можно дериватизировать по карбоксильным функциональным группам с помощью анилина и дицикло-гексилкарбодиимида в карбоксианилиды. Хорошую возможность для количественного определения открывает применение дейте-рированного анилина [150].

Из недавно опубликованных статей можно упомянуть следующие. Шино и др. [166] использовали 12-кетохенодезоксихо-левую кислоту в качестве внутреннего стандарта при определении желчных кислот в различных биологических объектах после экстракции, хроматографи

страница 152
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
инженерные системы обучение
бокалы для виски
знак на магните на учебную машину
компьютерные курсы +для пожилых

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)