химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

[1066] и желчных спиртов [108].

6.1.6. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

Применению высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа желчных кислот посвящено небольшое число работ. Причина здесь, возможно, в том, что газовая хроматография— настолько удобный и широко распространенный метод анализа желчных кислот, что высокоэффективная жидкостная хроматография не имеет такого же важного значения, как в анализе некоторых других типов стероидов (кортикостероиды, витамины D и т. д.).

Большие затруднения, препятствующие применению этого метода в анализе желчных кислот, вызывает то, что приемлемая чувствительность УФ-детектора достигается при длинах волн ниже 210 нм [35а, 73 (а—в), 76а, 123а, 134а, 140, 146, 162], а также необходимость дериватизации желчных кислот в нитрофенациловые [73], фенациловые [140, 177] или п-бром-фенациловые [127а] эфиры [см. схему (2.21)], что позволяет определять до нескольких нанограммов желчных кислот. Той же чувствительности добились Икенойя и сотр. [90а] при электрохимическом детектировании после получения л-оксианили-дов. Кемула и Кутнер [101а] применяли полярографический метод детектирования для недериватизированных желчных кислот. В этом случае чувствительность определения была средней между указанной выше и чувствительностью детектора по индексу рефракции, который часто используют, если чувствительность обнаружения не очень важна [13, 110, 146, 160, 165, 178].

Хотя разрешающая способность метода ВЭЖХ хуже, чем газовой хроматографии, его преимущество перед газовой состоит в том, что нет необходимости гидролизовать образец перед хро-матографированием (как в случае газовой хроматографии), поскольку ВЭЖХ позволяет разделять и количественно определять конъюгаты желчных кислот (включая 3-сульфаты [73в]). Паррис [146] разделял главные желчные кислоты и несколько конъюгатов на колонке с обращенной фазой зорбакс ODS, используя смесь метанола и водного^ раствора фосфорной кислоты (рН 2) в соотношении 8 :2. Джефферсон и Чанг [94] разделяли метиловые эфиры моно-, ди- и триоксихолановой кислоты на колонке с ц-порасилом при элюировании смесями этилацетата и гексана. Шоу и Эллиот [160] предварительно фракционировали конъюгаты желчных кислот в желчи человека на колонках

408 Глава 6

Желчные кислоты 409

с ц-порасилом, а также корасилом II и Cis-корасилом, а затем проводили повторное хроматографическое разделение полученных фракций с целью количественного получения индивидуальных желчных кислот и конъюгатов. Бейлок и др. [13] разделяли следующие желчные кислоты (цифры означают времена удерживания в минутах, буквами Т и Г обозначены конъюгаты таурина и глицина): Т-холевая кислота 3,2; Т-дезоксихолевая

VJ

0 5 Ю 75

Время, мин

Рис. 6.3. Высокоэффективная жидкостная хроматограмма желчи из желчного пузыря здоровых беременных женщин (несульфированная фракция, выделенная хроматографированием на сефадексе LH-20), полученная на колонке размером 30 смХ4 мм, заполненной и.-бондапаком CiS, при элюировании смесью 2600 мл метанола, 1400 мл воды и ацетатного буфера, приготовленного добавлением 10 М гидроксида натрия к 375 мл уксусной кислоты до рН 4,7; рефрактометрический детектор [НО].

1 — Т-холевая кислота; 2 — Г-холевая кислота; 3— Т-хенодезокснхолевая кислота; 4 — T-дезоксихолевая кислота; 5 — Г-хенодезоксихолевая кислота; б — Г-дезоксихолевая кислота.

кислотами» [162]; описано также применение колонок с диоксидом кремния с необращенными фазами [7].

Рис. 6.3 из работы [110] иллюстрирует возможность использования ВЭЖХ для серийных клинических анализов.

».J.7. ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ

Низкая селективность классических колориметрических и флуориметрических методов способствовала поиску более селективных и надежных методов. Фотометрический или флуори-метрический вариант метода, основанного на ферментативном окислении желчных кислот, отвечает этим требованиям, вследствие чего он быстро стал одним из наиболее важных методов определения желчных кислот в биологических объектах.

Метод основан на катализируемом ферментом окислении желчных кислот никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) до соответствующих кетопроизводных желчных кислот. Одновременно образуется восстановленная форма окислителя (НАДН), имеющая максимум поглощения при 340 нм. Поскольку ни одно из других участвующих в реакции соединений (окисленные и восстановленные формы желчных кислот, НАД) при этой длине волны не поглощают, селективность ферментов позволяет разработать высокоспецифичный метод определения, о

ОН

он

I I N

CHi—О—Р— О-Р -О-СНг

cl

НАД*

.C-NH2

кислота 4,1; Т-хенодезоксихолевая кислота 4,5; Г-холевая кислота 5,1; Т-литохолевая кислота 5,9; Г-хенодезоксихолевая кислота 7,3; холевая кислота 8,0; Г-дезоксихолевая кислота 8,2; Г-литохолевая кислота 12,9; дезоксихолевая кислота 14,0; хено-дезоксихолевая кислота 14,7. Разделение проводили на колонке с зорбаксом ODS при элюировании смесью метанола, 0,03 М водного раствора однозамещенного фосфата калия и уксусной кислоты (80 : 20 : I)

страница 150
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы веб-дизайна в мытищах
курсы 3д макс серпухов
покраска авто жидкой резиной
ореховые neo cosmo трехтоновые

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)