химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ой оболочки кишок или двенадцатиперстной кишки рахитичных цыплят [55, 94, 132а]. Специфичность связывающих белков была подвергнута тщательному изучению. В качестве примера на рис. 5.9 приведены результаты работы Тейлора и др. [201]. Здесь показано относительное количество меченного тритием 24,25-(ОН) а-витамина D3, связанного с цитозолом почек рахитичной крысы, в зависимости от концентрации витамина 63 и различных метаболитов. Очевидно, что витамин D3 и его 1,25-(ОН)г-производное практически не влияют на результаты определения 24,25-(ОН) 2-про-изводного, но другие метаболиты, 25-ОН- и 25,26-(ОН) 2-соеди-нения, мешают анализу, и их влияние можно устранить только

2 4 6

24R,25(OH)z-DJ,Ha

Рис. 5.8. Калибровочная

кривая для определения

24Н,25-(ОН)2-витамина D3

методом конкурирующего

связывания белка (связывающий белок — цитозол

почки рахитичной крысы)

[201]. v '

n"60

о Г

? 2

J 4а

? 3

• 4

А 5

0.5 7,0

? 6

_1_

ю ю2

Концентрация стерина, нг

РИС. 5.9. Вытеснение меченного тритием 24,25-(ОНЬ-витамина Ds из цитозола лочки рахитичной крысы витамином D3 и его метаболитами [201]

is~(~^dTok)lmh'' 5~24S'25-372 Глава 5

Витамины D и родственные соединения 373

с помощью предварительного хроматографического фракционирования, как описано выше.

Опубликовано лишь несколько статей, посвященных применению радиоиммунного анализа. Клеменс и др. [32а], а также Пикок и др. [160а] получили антисыворотку при иммунизации посредством 1,25-(ОН)2-03-гемисукцината. С помощью этой сыворотки, а также меченного тритием метаболита и модифицированного декстраном древесного угля они определяли 1,25-(ОН)2-витамин D в плазме.

5.2.11. МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ И РОДСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ

Как и в случае других стеринов, масс-спектрометрия является ценным средством идентификации витаминов D. Из множества возможных примеров сошлемся на работы Окано и др. [151] и Халкета, и Лисбоа [74]. В первой статье продукты облучения 7-дегидрохолестерина в коже крысы были идентифицированы с помощью ГЖ—МС после экстракции и очистки экстракта методом ВЭЖХ. В другой работе идентификацию и количественное определение гидроксилированных метаболитов витамина D3 проводили (после триметилсилилирования) с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии и масс-спектрометрии. Масс-спектрометрический метод определения витаминов D в присутствии других жирорастворимых витаминов описан Цукида и Сакаи [211].

Чрезвычайно высокая селективность и чувствительность этого метода могут быть использованы для решения разнообразных проблем в анализе витамина D. Де Леенхеер и Круил [39, 40] сообщили об определении витамина D3 в. плазме. После экстракции, удаления стеринов осаждением в виде дигитонидов и очистки на колонке с липидексом 5000 витамин D3, содержащийся в пробе, с помощью гептафтормасляного ангидрида превращали в гептафторбутират (изотахистерина)3 (разд. 5.2.8), а затем подвергали хроматографированию на колонке, заполненной 1 % FFAP на газохроме Q. Для количественного определения были выбраны молекулярные ионы гептафторбутирата (изотахистерина)3 (т/е 580) и гептафторбутирата (дигидрота-хистерина)2 (внутренний стандарт; т/е 594). Этот метод позволяет определить до 10 нг/мл витамина D3 в плазме.

Многие другие исследователи, применявшие масс-фрагмен-тографический метод, превращали витамины D в триметилси-лильные производные. Бъёркхем и Ларссон [18] определяли витамин D3 в сыворотке крови человека. В качестве внутреннего стандарта они использовали витамин D2, а многоканальный детектор настраивали на т/е 325 и 337, соответствующие М—131 пикам триметилсилилированных витаминов D3 и D2.

Бъёркхем и Холмберг [16] для определения 25-оксивитамина D» в сыворотке после экстракции, хроматографирования на сефа-дексе и триметилсилилирования в качестве внутреннего стандарта применяли 26-тридейтерированное производное. Для количественного определения использовали ионные пары с т/е 131 и 134. Хотя они являются базовыми пиками в масс-спектрах, Витней и др. [219] нашли, что с точки зрения точности определения лучше использовать интервал более высоких масс, пригодный для количественного определения других производных, как, например, ацетил- и трет-бутилдиметилсилильных производных. При определении 1,25-диоксиметаболита в плазме-крови человека Бъёркхем и др. [17] применяли в качестве внутреннего стандарта 26-тридейтерированное производное. Газо-хроматографическая колонка (как и в двух других работах) была заполнена SE-30 на хромосорбе W, измерение проводили по ионам при т/е 452 и 455, соответствующих отщеплению от молекулярного иона двух триметилсилильных групп. Загалак и др. [225] определяли витамин D3 и метаболиты в сыворотке крови после разделения с помощью ВЭЖХ, используя в качестве внутренних стандартов дейтерированные производные.

Всесторонне изученный масс-фрагментографический профиль концентраций витаминов D и их метаболитов был описан Симарком и др. [174а]. После фракционирования и очистки на липидексе 5000

страница 136
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ручки дверные с керамикой
комбинированные котлы отопления протерм
билеты на анну коренину
кресло 781

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)