химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

т, в которых проводится сравнение результатов этого метода с данными других методов [42, 60, 86, 90, 151, 246].

4.2.10. МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ И РОДСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ

В монографиях, упоминавшихся в разд. 2.2.15, содержатся обширные сведения по масс-спектрометрии стеринов.

Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией является ценнейшим методом быстрой идентификации стеринов в сложных смесях. Стерины обычно предварительно превращают в три мети лсилиловые эфиры, пригодные для газовой хроматографии и масс-спектрометрии [15, 34, 205]. Для тех же целей описано получение высших алкилсилиловых [100а, 237] и фторфенилдиметилсилиловых [229] эфиров.

Хотя наиболее часто ионизацию осуществляют пучком электронов, есть сообщения и об использовании химической ионизации [81, 93, 191].

Что касается новейшей техники в масс-спектрометрии, то при анализе стеринов в биологических образцах возрастает роль масс-спектрометрии фрагментов (фрагментография).С помощью этого метода Сейяма и др. [260] определяли холестерин и хо-лестанол в плазме с холестаном в качестве внутреннего стандарта. Еще большей специфичностью обладают методы, в которых в качестве внутреннего стандарта применяют меченые производные определяемых соединений. Например, Зикман и др. [265] определяли холестерин в сыворотке, используя в качестве внутреннего стандарта олеат холестерина, меченный 14С в положении 4. Известное количество этого соединения вводят в образец сыворотки, эфиры холестерина гидролизуют этаноль-ным раствором гидроксида калия и холестерин экстрагируют

314 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 315

циклогексаном. После выпаривания досуха холестерин превращают в триметилсилильное производное, смесь вводят в систему газовый хроматограф—масс-спектрометр и хроматограммы одновременно сканируют при т/е 458 и 460, соответствующих молекулярным ионам триметилсилильных производных немеченого и [14С] -холестерина. По интенсивностям этих двух пиков и количеству внутреннего стандарта можно рассчитать концентрацию холестерина в образце сыворотки.

По методике Гамберта и сотр. [93], разделение компонентов гидролизованной сыворотки проводилось с помощью капиллярной газовой хроматографии после силилирования. Внутренним стандартом при масс-спектрометрии фрагментов с химической ионизацией служил [3,4-13С] -холестерин, а в качестве ионизирующего газа — метан. Для количественного определения были выбраны ионы М-15.

Аналогичная методика описана Бъёркхемом и др. [26, 27], которые хроматографировали свободный холестерин и рассчитывали содержание сывороточного холестерина по отношению сигналов при т/е 386 и 389, являющимися соответственно молекулярными массами холестерина и его тридейтерированного производного. В методе, разработанном Тома и др. [277], в качестве внутренних стандартов применяли дейтерированные холестанолы.

Благодаря высокой разрешающей способности газовой хроматографии и высокой селективности масс-спектрометрии сочетание их представляет несомненно наиболее специфичный метод определения стеринов в биологических образцах и поэтому является идеальным эталонным методом. В то же время благодаря высокой чувствительности масс-спектрометрического детектирования эти методы также обладают чрезвычайно высокой чувствительностью и позволяют анализировать образцы сыворотки объемом до 0,5 мкл.

4.2.11. ДРУГИЕ МЕТОДЫ

Наличие Д5-двойной связи у холестерина и других стеринов позволяет использовать титриметрические методы. Шварц и Троянек [257] проводили реакцию между двойной связью и избытком брома в смеси хлороформа (или дихлорэтана) и уксусной кислоты и избыток реагента определяли обратным иодометрическим титрованием. Прямое титрование бромом в уксусной кислоте описано в статье Томичека и Долежала [278], а также Перельмана и Гаврилина [219]. Тришлер и Шивос [280] использовали в качестве титранта раствор ЛГ-бром-сукцинимида в уксусной кислоте при титровании с двумя индикаторными электродами.

Основой количественного метода может также служить аце-тилирование 3-оксигруппы смесью пиридин—уксусный ангидрид и титрование избытка реагента [224].

Стигмастерин в смеси стеринов можно селективно определить по полосе поглощения Д22-двойной связи в инфракрасной области [128].

В отличие от стероидов других классов радиоизотопные методы не играют заметной роли в анализе стеринов. Виикари [290] описал прямое определение радиоактивного холестерина в тканях. Определение микросомного холестерина описано Ни-колау и др. [198]. После экстракции холестерин обрабатывали меченным тритием уксусным ангидридом, удаляли избыток реагента и ацетат холестерина отделяли с помощью тонкослойной хроматографии на оксиде алюминия. После проявления молибдофосфорной кислотой пятно удаляли и измеряли его активность жидкостным сцинтилляционным счетчиком. Доинс и др. [65] разработали метод изотопного разбавления для определения стигмастерина.

Маречи и Скотт [178] на примере одновременного определения ацетата холестерина и Зр-хлор-5-холестена показали пригодность ЯМР-спект

страница 116
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить землю с коммуникациями рижское направление
туалетные столики с ящикасми для спальни
машины с водителем
маленький журнальный стол на колесах

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.05.2017)