химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ений основан на измерениях расхода кислорода в процессе реакции (4.1), проводимых амперомет-рически с помощью кислородного электрода. Кислород, растворенный в водном буферном растворе, взятом в качестве растворителя при проведении ферментативной реакции, содержится в избытке по сравнению со стехиометрическим количеством кислорода, расходуемого в реакции (4.1). Поэтому концентрация кислорода в ячейке в процессе измерения зависит от его исходной концентрации, концентрации холестерина и скорости ферментативной реакции при условии, что измерение проводят в герметической ячейке, где исключен контакт атмосферного кислорода с раствором. Если эти условия выполняются, изменение концентрации кислорода в процессе реакции происходит прямо пропорционально концентрации холестерина.

Концентрацию кислорода можно определить с помощью кислородного электрода Кларка [24, 50]. Он представляет собой мембранный электрод, состоящий из поляризуемого при —0,6 В платинового катода и Ag/AgCl-электрода сравнения; ячейку заполняют водным раствором хлорида калия (рН>7) и отделяют проницаемой для кислорода мембраной. При восстановлении кислорода на катоде за счет деполяризации последнего-происходит изменение тока пропорционально изменению парциального давления (концентрации) кислорода.

Все исследователи, применявшие этот принцип для определения холестерина [24, 33, 161, 203, 204], использовали анализатор * на глюкозу фирмы «Бекман» (таким же способом, но с другим ферментом можно определять глюкозу). Это позволяет одновременно записывать ток восстановления кислорода и кривую скорости расхода кислорода. На рис. 4.5 показаны такие кривые, взятые из статьи Номы и Накаямы [204], которые получили их следующим образом. В реакционную ячейку (вместимостью приблизительно 1 мл) помещают водный раствор, содержащий 0,6 М фосфатный буфер (рН 7,0), 10 мг/л азида натрия и 10 мл/л тритона Х-100. При проведении эксперимента раствор непрерывно перемешивают. Добавляют 30 мкл холестериноксидазы (20 МЕ/мл), регистратор прибора устанавливают в соответствующее положение и затем добавляют 10 мкл сыворотки. После того как ток вновь достигнет постоянного значения, прибавляют 20 мкл холестеринэстеразы (20 МЕ/мл) и, наконец, вводят 10 мкл стандартного раствора холестерина. Вся процедура занимает не более 6 мин, чувствительность, правильность и воспроизводимость при этом хорошие.

312 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 313

Для количественного анализа пригодны как кривая тока ъосстановления кислорода, так и кривая скорости расхода кислорода. Первую из них рекомендуют использовать Нома и Накаяма [204], а также Камено и др. [134], вторую — изготовители прибора [21].

Азид натрия, сильный ингибитор каталазы, вводят в реакционную смесь, потому что каталаза может присутствовать в качестве примеси. Каталаза способна разлагать перо-ксид водорода на воду и кислород, так что наблюдаемый расход кислорода был бы заниженным.

Третий вариант электрохимического метода ферментативного определения холестерина основан на амперометрическом определении пероксида водорода, образующегося в процессе ферментативного окисления. Этот принцип положен в основу метода, разработанного Хуан-гом и сотр. [116], которые предложили «холестериновый электрод» с иммобилизованным ферментом. Пероксид водорода восстанавливается на платиновом электроде при + 0,6 В относительно насыщенного каломельного электрода. Холесте-риноксидазу одну или вместе с хо-лестеринэстеразой иммобилизуют на поверхности вращающейся пористой ячейки из стекла, содержащего остатки алкиламина, модифицированные глутаровым альдегидом. ' Перемешивание осуществляется с помощью магнитной мешалки со скоростью 1080 об/мин. Для определения холестерина можно использовать и кинетический метод, и метод, основанный на измерении изменения общего тока. Для достижения устойчивого тока после добавления образца сыворотки (15 мкл) требуется около 10 мин. Если определяют свободный холестерин, и общее содержание холестерина, мешалка содержит в иммобилизованном виде только холестериноксидазу, а холестеринэстеразу добавляют в раствор в ячейке на второй стадии, как описано выше. Большим преимуществом этого метода является то, что иммобилизованные ферменты очень устойчивы (в течение 1— 2 мес при хранении в холодильнике) и с одним образцом фермента можно выполнить несколько сотен анализов. Это позволяет в клинической практике проводить чрезвычайно дешевые анализы, и в ближайшем будущем следует ожидать быстрого развития метода [239].

Измерительная ячейка другого типа с использованием аналогичного принципа была сконструирована Ханом и Олсоном [100]. В разработанной ими методике гексацианоферрат(Н) калия окисляется образующимся в процессе ферментативного окисления холестерина пероксидом водорода. Метод основан на амперометрическом определении образующегося гексациано-феррата(Ш) калия с помощью цилиндрического графитового электрода.

В заключение раздела, посвященного ферментативному определению холестерина, важно упомянуть несколько рабо

страница 115
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Акция KNS - Кликни и закажи со скидкой. Промокод "Галактика" - купить в кредит онлайн - корпоративные поставки по всей России.
привод клапана siemens sax61
топпер с кокосом скручивающийся
технические данные электромеханического привода мв(220(

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.03.2017)