химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

с образованием формальдегида, который затем подвергается циклизации Ганча с ацетилацетоном и аммиаком. Образующийся дигидродиацетиллутидин определяют, измеряя поглощение при 405—415 нм.

катализа /л л\

НгОг + CHjOH *. HCHO + 2 Н,0 <44>

О О

II N

О"

с-сн,

HCHO + 2CH,-C-CH,-C-CHi + NH,

XX

№<Г ^IjT Лгн,

н

О II

HjC—С

+ 3HjO

(4.5)

3,5-Зиацетил-Т, ь-дигидропутидин

Если требуется определить общее содержание холестерина, перед проведением анализа необходимо провести гидролиз эфиров холестерина.

Преимущество этой методики состоит в том, что в отличие от методики с образованием хинонимина выполнению определения не мешает билирубин, о чем часто упоминается в литературе, а недостаток — в медленном развитии окраски: в оригинальной методике [250] указано, что продолжительность реакции 1 ч. С целью облегчить применение автоматических анализаторов обсуждаемый метод был модифицирован и время анализа сокращено до нескольких минут [73, 148, 192, 202, 220, 245, 248, 268, 305].

В качестве типичного примера кратко рассмотрим методику Ноббса и др. [202]. Реагент, применяемый в этом методе, содержит 550 мМ фосфатного буфера (рН 7,0), 1,6 мМ метанола,

19 мМ ацетилацетона, 6,4-105 ME каталазы, 130 ME холестеринэстеразы, 80 ME холестериноксидазы и 0,1 % оксиполиэток-сидодекана. Из смеси 0,1 мл плазмы и 0,2 мл воды отбирают

20 мкл пробы и вводят в реакцию с 500 мкл этого реагента при 37 "С. Содержание общего холестерина рассчитывают по-изменению поглощения при 405 нм в течение первых 7 мин после начала реакции.

Статья Ричмонда [242], посвященная колориметрическому измерению концентраций хелата титана(IV) с пероксидом водорода и ксиленоловым оранжевым, была первым сообщением о ферментативном определении холестерина, основанном на измерении количества пероксида водорода, образовавшегося в процессе ферментативного автоокисления. Хотя описан [243] и автоматизированный вариант этого метода, он не получил такого широкого распространения, как методы, обсуждавшиеся ранее. Для ферментативного определения использовали также реакцию комплексообразования с 2,2'-азинобис(3-этилбензо-тиазолин-6-сульфокислотой) [299].

Метод Хэкеля и Перлика [99] основан на взаимодействии пероксида водорода, образующегося в процессе ферментативного окисления холестерина, с этанолом с образованием аце-тальдегида; он восстанавливает никотинамидадениндинуклео-тидфосфат в присутствии альдегиддегидрогеназы, давая окрашенное соединение, поглощение которого можно измерить при 334—340 нм.

Наконец, стоит заметить, что ферментативное превращение 3-оксистеринов может привести к образованию 4-ен-З-кетопро-изводных, сильно поглощающих при 240 нм. Этот принцип положен в основу определения активности ферментов [35, 266, 299].

310 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 311

Флуориметрические методы

При ферментативном определении холестерина флуориметрические методы играют гораздо менее важную роль, чем колориметрические. В основе их также лежат реакции (4.1) и (4.2). Метод Фрухарта и др. [91, 92] -включает те же химические стадии, что и обсуждавшийся выше метод Рёшлау и др. [250]. Образующийся дигидродиацетиллутидин определяют по флуоресценции при 485 нм (возбуждение при 405 нм).

В методиках Хуанга и др. [115] и Хайдера и Бойетта [105] пероксид водорода в присутствии пероксидазы окисляет гомо-ванилиновую и /г-оксифенилуксусную кислоту соответственно с образованием флуоресцирующих соединений.

Как известно, пероксид водорода индуцирует хемилюми-несценцию различных реагентов, что положено в основу метода Ригина [244]. Пробу (100 мкл плазмы) пропускают через две колонки, одна из которых содержит иммобилизованную холесте-ринэстеразу, а другая — холестериноксидазу, и затем элюат из второй колонки, содержащий пероксид водорода, смешивают <; люминесцентным реагентом, содержащим бис(3,4,6-трихлор-•фенил)оксалат, 9,10-дифенилантрацен и триметиламин в ди-оксане.

Электроаналитические методы

Электрохимические варианты метода ферментативного определения холестерина также основаны на реакциях (4.1) и (4.2), и в них измеряют либо увеличение концентрации пероксида водорода, либо уменьшение парциального давления кислорода за счет потребления его в реакции (4.1).

Впервые эта возможность была использована Папастафо-?пулосом и Рехнитцем [211]. В разработанном ими методе образующийся пероксид водорода обрабатывали иодид-ионами [в присутствии катализатора Mo(VI)]:

Н202 + 21" + 2Н+ |2 + НаО (4.6)

Уменьшение концентрации иодид-иона, измеренное с помощью иодид-селективного мембранного электрода, прямо пропорционально концентрации пероксида водорода и, следовательно, холестерина. Калибровочный график линеен до концентрации холестерина примерно 5 г/л. Воспроизводимость результатов сравнима с воспроизводимостью данных колориметрических методов, а измерения можно автоматизировать с помощью системы автоанализатора, что делает метод пригодным для серийных анализов образцов сыворотки.

Другой тип определ

страница 114
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://www.kinash.ru/etrade/goods/4439/city/moscow.html
итальянские наклейки на ступню купить
изготовление металлической мебели по индивидуальным заказам
зеркало настенное купить недорого в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.07.2017)