химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

егг [88] и в 1974 г. Ричмонд [242] и Рёшлау с сотр. [250] опубликовали статьи, посвященные определению холестерина в сыворотке, включающему ферментативное окисление холестерина и колориметрическое определение образующегося пероксида водорода. Этот принцип быстро приобрел популярность; так, за последние 5 лет он был описан примерно в 50 работах, и различные варианты оригинального метода теперь стали стандартными при выполнении клинических анализов. Столь быстрому развитию метода способствовали следующие причины:

20 Заказ № 182

306 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 307

+ о»

1) В различных вариантах этого метода, обсуждаемых ниже, участвуют по крайней мере один, а в некоторых случаях два или даже три фермента. Высокая специфичность ферментативных реакций обусловливает очень высокую специфичность метода.

2) Высокая специфичность метода позволяет не прибегать к длительным стадиям разделения, необходимым при проведении анализа менее специфичными методами.

3) Холестерин определяют косвенным методом по содержанию пероксида водорода, который с аналитической точки зрения является гораздо менее «трудным» соединением, чем сам холестерин.

4) Ни колориметрические, ни электрохимические варианты этого метода не требуют агрессивных реагентов, часто необходимых при выполнении анализа химическими методами.

5) Ни один из вариантов ферментативного метода не является трудоемким и длительным и легко поддается автоматизации.

6) Эти методы характеризуются высокой чувствительностью. Все варианты ферментативного метода основаны на реакции: нительного изучения холестериноксидаз из двух упомянутых я других источников. Изучено влияние рН, концентрации фермента и субстрата, ионной силы, природы двухзарядных катионов и различных поверхностно-активных веществ на актив-лость фермента.

Смит и Брукс [35, 266] изучали специфичность фермента. Они нашли, что скорости окисления стеринов, обладающих ЗВ-оксигруппой, сопоставимы, тогда как реакционная способность других 5-ен-ЗВ-оксистероидов (ряда прегнана и особенно андростана) на порядок-другой ниже.

Если выполнение анализа начинают с ферментативного окисления, определить можно, очевидно, только свободный холестерин. Для определения общего содержания холестерина перед окислением необходимо провести гидролиз его эфиров. Большинство исследователей проводят его с помощью холесте-ринэстеразы.

эфиры холестерина+НаО *°ле"еринэстераза | холестерин+жирные кислоты (4.2)

Сообщается также и об использовании щелочного гидролиза [161, 243]. Очень важно и на стадии омыления, и на стадии окисления добавлять подходящее поверхностно-активное вещество (тритон Х-100, оксиполиэтоксидодекан, холат натрия), чтобы разрушить комплексы с сывороточными липопротеинами и удержать холестерин в мицеллярном растворе.

Количественное определение во всех случаях основано на образовании пероксида водорода. Описаны две основные методики — колориметрическая и электроаналитическая.

HrOj

(4.1)

*-холестен-з-он

Холестериноксидазу, используемую большинством исследователей, выделяют из Nocardia erythropolis (этот фермент выпускает фирма «Boehringer» Mannheim, ФРГ). Отани и сотр. [208] рекомендуют применять фермент, выделенный из Strepto-myces. Нома и Накаяма [203] опубликовали результаты сравOk

{-him,"'*™'*™* Т I

HjC

4 -аминаантипирин

Колориметрические методы

В основе наиболее распространенных колориметрических методик лежит реакция между пероксидом водорода, фенолом и 4-аминоантипирином, приводящая в присутствии пероксидазы к образованию хинониминового красителя, поглощение которого можно измерить при 500—520 нм [6, 19, 42, 53, 73, 108, 167, 208, 221, 222, 238, 246, 273, 293, 298, 309]. Эти методики 20*

308 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 309

чрезвычайно просты. Хотя последовательно протекает ферментативный гидролиз, окисление и образование красителя, все три реакции проводят в одном реакционном сосуде одновременно и все необходимые ферменты и химические вещества смешивают в процессе приготовления реагента. Например, метод определения общего содержания холестерина в сыворотке (Отани и др. [208]) основан на инкубировании -в течение 30 мин при 37°С 25 мкл сыворотки с 2,5 мл реагента, содержащего 0,82 мМ 4-аминоантипирина, 14 мМ фенола, 20 мМ хо-лата натрия, 100 мМ фосфатного буферного раствора (рН 6,8), 400 ME холестеринэстеразы, 37 ME холестериноксидазы и 1900 ME пероксидазы. Поглощение измеряют при 500 нм относительно раствора реагента. Аналогичным образом определяют содержание свободного холестерина, но при этом используют 100 мкл сыворотки и реагент, не содержащий холестеринэстеразы. Методики, описанные в других статьях, имеют много общего, главное различие между ними заключается в способе и степени автоматизации *.

Другой колориметрический метод, впервые описанный Рёшлау и др. [250], также основан на автоокислении холестерина, катализируемом холестериноксидазой. В этом случае образующийся пероксид водорода реагирует с метанолом в присутствии каталазы

страница 113
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Рекомендуем компанию Ренесанс - лестница в доме загородном - качественно, оперативно, надежно!
Волховец Бук серый
характеристика предприятия по выпуску урн
сетка рабица тамбов

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.06.2017)