химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

ях первоначальной методики служит смесь уксусной кислоты, серной кислоты и хлорида железа (III). Обычно соотношение серной и уксусной кислот в конечной реакционной смеси составляет 40 : 60 (по объему), а концентрация железа приблизительно 10 мг в 100 мл. Почти мгновенно возникает красная окраска, а максимум поглощения наблюдается при 560 нм. Молярные коэффициенты поглощения холестерина и его эфиров идентичны. Главное преимущество этого метода по сравнению с методом Либермана—Бурхарда заключается в том, что его чувствительность приблизительно в 8 раз выше. Такая же окраска возникает в присутствии и других Д5-3-оксистерои-дов, более того наблюдаются помехи со стороны ряда других веществ, находящихся в биологических системах. Поэтому к результатам, полученным методом Златкиса—Зака для сложных биологических систем, следует относиться с осторожностью. Для устранения этих затруднений рекомендуются очистка анализируемого образца на ионообменной смоле дауэкс 1-Х8 и экстракция смесью хлороформа с метанолом (2:1) [264]. Парэк и др. [212, 213] предложили реагент, содержащий ацетат железами), сульфат железа(П) и уранилацетат. Поскольку в первоначально предложенном реагенте присутствовал только хлорид железа (III), ожидалось, что последний реагент будет более специфичен, что, однако, недавно было подвергнуто сомнению [10].

При использовании железосодержащих реагентов для определения холестерина в плазме, консервированной азидом натрия, получаются заниженные результаты [139].

Следует упомянуть о применении реагента Чугаева (хлорид' цинка и ацетилхлорид в уксусной кислоте). В присутствии холестерина и его эфиров возникает красно-розовая окраска, максимум поглощения наблюдается при 526 нм. По чувствительности относительно холестерина реагент Чугаева занимает промежуточное положение между двумя обсужденными выше (еда8800), причем в присутствии эфиров холестерина окраска менее интенсивна. В силу ряда технических трудностей этот метод не получил такого же широкого распространения для количественного определения стеринов, как методы, описанные выше. Недавно реакция Чугаева была подвергнута новой проверке в работе Холодовой и др. [140].

Для количественного колориметрического определения стеринов описаны и другие реагенты [20, 55, 133, 154], но большинство из них уже не применяется. Во многих работах, посвященных колориметрическому определению стеринов, в последнее время описываются варианты методов Либермана—Бурхарда, Златкиса и Зака [304, 308] или колориметрический вариант ферментативного метода, обсуждаемого в разд. 4.2.9. Одна из редких попыток предложить новый реагент описана в работе Джунгриса и Раппа [131], которые использовали реагент, содержащий 20 мл хлорида сурьмы(У) и 5 г хлорида сурьмы(Ш) в 100 мл хлороформа и образующий окрашенное соединение с максимумом поглощения при 470 нм.

4.1.2. ФЛУОРИМЕТРИЯ

Когда с целью колориметрического определения (обсуждавшегося в предыдущем разделе) холестерин обрабатывают реагентами, содержащими большие количества серной кислоты, образование окрашенных соединений обычно сопровождается флуоресценцией, которая может стать основой более чувствительного метода определения, чем колориметрический метод.

Альберс и Лоури [5], например, превращали холестерин, содержащийся в экстрактах тканей, в флуоресцирующее производное путем обработки его реагентом, подобным реагенту Либермана—Бурхарда [экстракт обрабатывали 6 мкл серной кислоты после растворения в 150 мкл смеси 1,1,2-трихлорэтана и уксусного ангидрида (5:1)]. Холестерин и его эфиры дают очень близкие по интенсивности, чрезвычайно устойчивые сигналы, если измерение основано на регистрации красной флуоресценции, возбуждаемой линией ртутной лампы при 546 нм. Этим методом можно определять очень небольшие количества холестерина (до 0,1 мкг). Подобные методы описаны и другими авторами [43, 181, 294] и обсуждены в обзорах Бартоша и Пезе [20] и Элевича [74].

Недавно Майески и др. [174] описали флуориметрический вариант реакции Сальковского, в котором смешивают равные объемы концентрированной серной кислоты и раствора определяемого холестерина в дихлорметане, энергично встряхивают и измеряют флуоресценцию сернокислого слоя при 450 нм, используя источник возбуждения с длиной волны 415 нм. Эфиры холестерина перед выполнением анализа омыляют. Этот метод имеет значительно более низкую чувствительность, чем метод Альберса—Лоури, но все же он пригоден для определения холестерина в 250 мкл сыворотки крови.

Применение реагента, содержащего смесь хлорида железа (III) и серной кислоты (растворенных в этилацетате),

288 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 289

позволило разработать чувствительный метод определения 0,1— 5 мкг холестерина, описанный Баджио и др. [14]. Его успешно применяли для определения холестерина в липопротеиновой фракции, полученной электрофорезом на геле агарозы.

Флуориметрический вариант ферментативного определения холестерина описан в разд. 4.2.9.

4.2.3. МЕТОДЫ ОСАЖДЕНИЯ В ВИДЕ ДИГИТОНИДОВ

Ранние набл

страница 105
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аренда плазмы 50 дюймов на стойке
прокат лимузина цена
004.040702.019
Журнальный столик 4sis Феррара 610384

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.01.2017)