химический каталог




Количественный анализ стероидов

Автор Ш.Гёрёг

аиболее важным является, несомненно, метод Либермана—Бурхарда. Обсуждение многочисленных работ, посвященных превращению первоначальной методики качественного обнаружения [38, 168] в надежный метод количественного определения и его применению для решения различных задач, можно найти в монографиях [20, 55, 133, 155] и обзорных статьях [179, 304]. Здесь будут рассмотрены только наиболее важные особенности этого метода.

Анализ основан на измерении интенсивности зеленовато-голубой окраски, возникающей после обработки холестерина смесью уксусного ангидрида и серной кислоты в соотношении от 20 : 1 до 5 : 1. Во многих работах сообщается, что этот реагент разбавляют различными растворителями (главным образом хлороформом и уксусной кислотой). Для приготовления реагента Абеля и сотр. [1, 2], наиболее часто используемой модификации реагента Либермана—Бурхарда, 1 объем концентрированной серной кислоты смешивают с 20 объемами уксусного ангидрида, охлажденного ниже 10°С, и затем к смеси, охлажденной в течение 9 мин, добавляют 10 объемов ледяной уксусной кислоты. Такой реагент пригоден для работы в течение 1 ч. Определяемый стерин растворяют непосредственно в этом реагенте. Скорость развития окраски и ее устойчивость зависят от температуры. Упомянутые выше исследователи [1, 2] указывают, что продолжительность реакции составляет 30— 35 мин при 25°С. Хуанг и сотр. [117] получили устойчивый pea--гент (при хранении в холодильнике пригодный в течение месяца), готовя 2 %-ный раствор сульфата натрия в смеси уксусного ангидрида, уксусной и серной кислот в соотношении 6:3:1 (по объему). Этот реагент до сих пор находит широкое применение.

Окрашенный продукт характеризуется двумя максимумами поглощения при 420 и 620 нм, причем последний используется в большинстве аналитических методов, несмотря на то что известно, что поглощение при меньшей длине волны более стабильно [138]. Чувствительность этого метода довольно низкая, так как, согласно данным по поглощению, приводимым разными авторами, молярный коэффициент поглощения для холестерина лежит в интервале 1800—2000. Для эфиров холестерина чувствительность несколько выше.

Селективность реакции обсуждалась многими авторами, но наиболее полно она изучена Куком [56]. Кук установил, что в данном случае содержание серной кислоты в реагенте намного ниже, чем в реагенте для колориметрического определения стероидных гормонов. Благодаря этому большинство стероидных гормонов не образует с реагентом характерно окрашенного продукта и не мешает определению холестерина. Хотя развитие окраски обусловлено наличием в молекуле р, у-нена-сыщенной оксигруппы, Д5-3-оксистероиды, не имеющие углеродной боковой цепи при С-17, положительной реакции не дают. Положение и интенсивность полос практически не зависят от природы боковых цепей при С-17 в случае Д5-Зр-оксистеринов, и поэтому этот метод ни в коем случае не пригоден для прямого анализа смеси стеринов растительного происхождения. Интенсивность окраски Д5'7-3-оксистеринов почти в 4 раза выше интенсивности окраски холестерина, и, что даже более интересно, она развивается почти мгновенно, тогда как в идентичных экспериментальных условиях для развития окраски в присутствии холестерина требуется около получаса. Это явление было использовано для одновременного определения холестерина и 7-дегидрохолестерина по измерению поглощения при 620 нм через 1,5 и 33 мин с момента начала реакции [184].

Селективность и устойчивость окраски можно повысить введением в реагент ароматических сульфокислот. Из многочисленных модификаций этого метода следует упомянуть метод Уотсона [292] с использованием 2,5-диметилбензолсульфокис-лоты, на который часто ссылаются.

Очень важной особенностью специфичности этого метода является то, что на возникновение и развитие окраски не влияет присутствие дигитонина, поэтому его можно непосредственно применять для количественного определения свободных стеринов, выделенных из сложных биологических систем в форме нерастворимых дигитонидов (см. разд. 4.2.3 и 4.3.2), на чем основаны классические методики Шеихаймера—Сперри [255] и Сперри—Вебба [267].

Изучению механизма реакции Либермана—Бурхарда посвящено много статей. В основном благодаря работам Брискорна и сотр. [29—32] установлено, что при этом образуется ряд окрашенных продуктов, спектральные характеристики которых можно получить после разделения методом колоночной хроматографии на сефадексе LH-20 [30]. Первая стадия реакции заключается в дегидратации с образованием 3,5-диенов с последующей окислительной ди- и тримеризацией последних до высоко

286 Глава 4

Холестерин и родственные стерины 287

сопряженных производных. Роль серной кислоты не ограничивается только дегидратирующим и окислительным действием — она сульфирует продукты реакции, затрудняя тем самым их экстракцию и изучение структуры.

Из других колориметрических методов с методом Либерма-на—Бурхарда по важности сравним только метод Златкиса— Зака и др. [302—304, 308]. В качестве реагентов в многочисленных модификаци

страница 104
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189

Скачать книгу "Количественный анализ стероидов" (6.71Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы профпереподготовки инженеров
очки кинотеатр купить
аквапарки крыма 2017
станка вса 97 для сетки рабицы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.05.2017)