о. Данные | из публикации [276].

Вычислительная машина обрабатывает информацию н выводит ее на экран за считанные микросекунды. Опрос диодной матрицы ("сканирование") производится 160 раз в I с. При скорости потока 3 см/мин это соответствует болес 30 точкам данных на среднее стандартное отклонение ширины пятна. Хроматограмма регистрируется и может- постепенно выводиться на экран. Пример появляющегося на экране изображения показан на рис. 102.

При таком способе элюирования и обнаружения слой частиц диаметром Ю мкм. занимающий участок 10x10 см, обеспечивал нагрузочную емкость (оцениваемую по числу пятен) SX = 900, а общая продолжительность двухмерного элюирования составляла 30 мин. При оптимизированных условиях можно достичь SN > 1000 [276). что соответствует совершенно новым границам разделительной способности п новым возможностям обнаружения (см. табл. 10).

Альтернативным способом обнаружения непосредственно на пластинке н цифровой обработки данных может стать применение видеокамеры и компьютера. Пластинка просвечивается, (рис. 103), а пятна делаются

визуально обнаруживаемыми (например, за счет прокаливания пластинки), если не имеется возможности регистрировать ж непосредственно по тушению флуоресценции. Манабе и Окуяма [284] в 1983 г. разработали систему, пригодную для полуколичесз венного анализа прокрашенных электрофореграмм. полученных при разделении белков и аминокислот. Система обладала разрешающей способностью 3(1 мкм и стала промышленно выпускаться фирмой lmmuno-Medical (Токио, Япония). Аналогичная система была сконструирована Протеком с соаат, [276]. Обе системы преобразуют сигнал в черные и белые элементы изображения. Для получения зависимых от концентрации серых тонов используется ограничение уровня чувствительности с различной продолжительностью выдержки Для большинства видов биологических исследований может оказаться достаточно воспроизводимости 10%. Поскольку обрабатывается информация о сигнале, преобразованная в цифровую форму, вычитание фона, интегрирование (и прочие виды обработки) реализуются весьма просто (см. рис. 102). Наиболее усовершенствованная система была описана в 1986 г. Белчамбером с соавт. [296]. В системе применялись ^усовершенствованная видиконкая камера (Newvicon) и устройство обработки изображений, дающее возможность поэлементного вычитания фона, расширения рабочего диапазона, фильтрации шумовых выбросов, применения подставного цветного фона, введения порогового ограничения, контурного выделения нужных элементов изображения и интегрирования таких элементов. Система характеризовалась динамическим диапазоном порядка 1:10. Пользовались телекамерон, чувствительной к ультрафиолетовому свету и дававшей возможность "детектирования по накоплению заряда". Такой подход, предложенный 'Дж.Э.Косгрувем (фирма Eastman Codak), представляется перспективным (пример реализации этой системы приведен на рис. 104). К сожалению подобные устройства еще не выпускались промышленностью в 1989 г.

ЗА

Представление о потенциальных возможностях трехмерной тонкослойной

хроматографии дают следующие сопоставительные данные (которые в равной степени характеризовали бы и трехмерный вариант колоночной жидкостной хроматографии): для скорости около 3 см/с через слой частиц с размерами 5 мкм при толщине слоя в 10 см (соответственно данным, подсчитанным Гношоном с соавт [93]) числа разделений (нагрузочная емкость, оцениваемая по количеству пиков) составляет около 50 в одномерной тонкослойной хроматографии (под давлением), 1200 в двухмерной тонкослойной хроматографии или около 21000 в трехмерном варианте (тонкослойной или колоночной жидкостной хроматографии) при давлении около 25 атм. При употреблении сорбента с размером частиц 15 мкм, соответствующими окажутся следующие цифры: 30, 400, 5300 и 0.8 аты.

i и круговой

Используемый двухмерный принцип может быть, теоретически, усовершенствован применением "трехмерной колонки" (т.е. пористого кубика), чему препятствует, в основном, отсутствие соответствующего детектир