нситометром, обеспечивается легче и оказывается более точной, чем регистрация ширины по уровню основания (поскольку в последнем случае приходится проводить определение графически, достраивая касательные из точек перегиба). Коша предел обнаружения превышает 1/10 от концентрации, соответствующей вершине пика (это возможно, если концентрации в образце слишком малы или если пятна размыты), ширина регистрируемого пика оказывается меньше фактической, в результате чего значение Я оказывается слишком заниженным (см., например, рис. 31, 32 или самые нижние кривые на рис.36). В таком случае визуальное определение по bo.s приведет к недопустимым отклонениям (< 40%) в любую сторону от правильного значения Н [?}]. Другая типичная ошибка определения Н наблюдается при перегрузке образцов и при нелинейных изотермах сорбции. Оби эти фактора приводят к нарушению симметрии зоны и, следовательно, к завышенным значениям И. (В ряде случаев для оценки эффективности хроматографической пластинки может оказаться

полезной величина "число разделений" SN. Число разделений - это число соединений, которые можно полностью разделить между линией старта (Rr=0) и фронтом элюента (Rr=l), если хроматографическне условия вдоль пути разделения постоянны. Более подробно эта величина обсуждается в разд. Н.Б.4. - Прим.ред.)

Подводя итоги сказанному, напомним, что для получения надежных значений И рекомендуется учитывать следующие правила:

а) соответствующий зоне максимум концентрации должен быть, по

меньшей мере, в 10 раз выше предела обнаружения;

б) несимметричные или плохо разделившиеся пятна не должны

использоваться для определения ~Н\

в) отмеченная дисперсия зоны о3, в том направлении, в котором

проводилось элюирование, складывается из ряда составляющих;

Использовать следует только о>?». иначе значения Н оказываются крайне завышенными (см.рис.37). Необходимо указать еще одно осложняющее обстоятельство. Суммирование квадратов величии дисперсии может использоваться только тогда, когда все вклады в дисперсию, обусловленные не самим хроматографическнм разделением, характеризуются гауссоеским распределением. Конечно, такой характеристикой o»«c не обладает. Значения Я должны быть приведены к значениям ~Н при Rr =0.5 (к значениям Я») методами интерполяции или экстраполяции. Если этого сделать не удается, необходимо указывать Rr пятна вешества, для которого определяли Н (поскольку значения Н сильно зависят от Rr (см.рис. 36). (Р.Е.Кайзер предложил пользоваться "числом фактических тарелок" или "высотой фактической тарелки* для указания эффективности слоя: N««, =I2.MV« «-bc)2-5.54-l i>u.r = L/N^: bo - ширина пятна на старте. Однако употребление этих значений не дает преимущества,

поскольку они в еще большей степени зависят от Rr, чем Н, а все

теоретические обоснования так или иначе оказываются связанными с Н.) г) визуальная оценка не дает достаточной точности.

3. Параметры, влияющие иа высоту тарелки.

Уравнении Ваи-Деемтсра - Гиддиигеа В предыдущем разделе обсуждался способ экспериментального определения усредненной высоты тарелки Н или Нм«я. Теперь рассмотрим, как параметр И теоретически связан с различными (определяющими режим работы) параметрами, дающими вклад в размывание зоны. Хотя классическая модель, предложенная Ван-Деемтером-Гиддингсом (эта проблема размывания зоны рассмотрена также в [29)), частично устарела (особенно в том. что касается члена А), тем не менее в данной книге этот материал сохранен, поскольку отличается простотой пояснений и ознакомление с ним полезно при изучении метода.

Воспользуемся сначала определением Гиддингса [27] для локальной высоты тарелки H.w

H„=dff'Mz (12)

Здесь Н™ - дифференциал возрастания дисперсии гт/ пятна, характеризующегося гауссовским распределением; dz • дифференциал пути, пройденного пятном. В таком случае проинтегрированное (усредненное) значение высоты тарелки будет определяться выражением;

И - /11 ~* 4 А = п%, = o>/(zrz*)R, (12а)

Данное уравнение опять же дает информацию о способе определ