химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

оматографической пластинки интенсивность флуоресценции значительно снижается.

4. ПЕПТИДЫ

Ряд авторов с успехом использовали хроматографию в тонком слое для анализа ферментативных гидролизатов белков [3, 7, 16, 17]. Двумерной хроматографией можно получить пептидные карты в системах: хлороформ — метанол — 25%-ный NH4OH (2:2:1) и пиридин — уксусная кислота — бутанол — вода (40 : 14 : 68 : 25) (двукратная хроматография).

В качестве носителя рекомендуется использовать силикагель марки кизельгель S (фирма Macherey-Nagel, ФРГ). Перед опытом слой силикагеля в течение 30 мин прогревают при 110° С и после первого разделения прогревание повторяют. Чаще всего тонкослойную хроматографию комбинируют с электрофорезом.

Обычно пептидная карта может быть получена за 5—10 ч. Ричард [14], анализируя триптический гидролизат миозина хроматографией в тонком слое силикагеля (кизельгель G), на первом этапе использовал горизонтальную продолжительную хроматографию в смеси хлороформ — метанол — 34%-ный NH4OH (2:2: 1). На втором этапе разделения был проведен электрофорез в смеси пиридин — уксусная кислота — вода (1 : 10 : 489) в течение 1 ч при напряжении 980 В. Бальё и др. [3] проанализировали триптический гидролизат восстановленного и алкилированного IgG человека с по-помощью хроматографии в тонком слое силикагеля марки кизель-гель G (фирма Merck, ФРГ), содержащего 0,5% амилопектина. Слой носителя после приготовления хроматографической пластинки был высушен на воздухе. До опыта пластинки хранили в эксикаторе, а затем использовали их без прогревания. На первом этапе разделения была применена продолжительная проточная хроматография в смеси пропанол — этанол — концентрированный аммиак — вода {20:60:2: 20) в течение 7—8 ч. После этого пластинку подсушивали при 60°С и подвергали электрофорезу в том же буферном растворе, который использовал Ричард [14], в течение 50 мин при напряжении 1000 В.

Б. ТОНКОСЛОЙНАЯ ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ

Тонкослойный вариант гель-фильтрации был предложен Детер-маном [6], а также Иоханссоном и Римо [111 и оказался весьма полезным для микроанализа и быстрого сравнительного анализа нескольких образцов исследуемого материала. Эндрюс [1 ], а позднее Моррис [12] применили тонкослойную гель-фильтрацию для определения молекулярного веса белков на основе установленной ими линейной зависимости между логарифмом молекулярного веса данного белка и расстоянием, пройденным им в слое данного носителя за определенный помежуток времени. В соответствии с этим можно ориентировочно определять молекулярные веса неизвестных белков, если одновременно проводить гель-фильтрацию стандартных белков известного молекулярного веса. Когда исследователь располагает достаточно чувствительными методами обнаружения белка в слое носителя, для определения молекулярного веса достаточно всего лишь нескольких микрограмм исследуемого материала. При определении молекулярного веса белков гель-фильтрацией в тонком слое следует иметь в виду, что подвижность данного белка при хроматографии в гель зависит не только от молекулярного веса, но и от формы его молекул. Поэтому определение молекулярного веса с помощью гель-хроматографии правомерно лишь в том случае, когда форма молекул исследуемого белка незначительно ?отличается от формы молекул стандартных белков, используемых для калибровки.

Для тонкослойной гель-фильтрации слой носителя готовят из <:амых мелких гранул геля. Из препаратов, имеющихся в продаже, применяются гели декстрана марки сефадекс «сверхтонкий» или лолиакриламидные биогели марки «—400 меш». В описанных в литературе методиках тонкослойной гель-хроматографии в основном рекомендуется пользоваться сефадексом, но биогели, в данном, случае подобвы сефадексам.

Набухание гелей происходит в тех же условиях и осуществляется так же, как и при подготовке более крупных частиц геля для колоночной хроматографии. Целесообразно при набухании геля использовать больший объем раствора, чем минимально необходимый согласно емкости по воде, а перед нанесением на пластинку удалять избыток жидкости над гелем.

Наиболее подходящая толщина слоя носителя — 0,5 мм. Дли нанесения носителя на пластинки могут быть использованы описанные выше приборы, позволяющие получать слой разной толщины. Если суспензию носителя раскатывать стеклянной палочкой, на обоих концах которой наклеено несколько витков изоляционной ленты, также образуется достаточно ровный слой. Свежеприготовленные пластинки в течение 20—25 мин подсушивают на воздухе. Их можно» довольно долго хранить во влажной камере, если исключена возможность бактериального роста. При нисходящей тонкослойной гель-фильтрации пластинку располагают в камере под углом 10—15°. Как правило, гель-фильтрацию проводят в водных растворах, поэтому хроматографическая камера может быть изготовлена из пластмассы. Она состоит из кюветы для буферного раствора, рамки, поддерживающей пластинку под соответствующим утлом, и крышки. Подача буферного раствора на пластинку осуществляется с помощью-фитиля из фильтровальной бумаги. В качеств

страница 98
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
где можно разместить холодильник на временное хранение?,
high fresh капли отзывы
MACX.75.1114
садовые качели стандарт 2

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)