химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

— хроматографию в перпендикулярном направлении в смеси бутанол — уксусная кислота — вода (4:1:2).

1. ДНФ-АМИНОКИСЛОТЫ

Силикагель хорошо зарекомендовал себя в качестве носителя для тонкослойной хроматографии ДНФ-аминокислот.

Примерно 25—30 г силикагеля суспендируют в 60—65 мл дистиллированной воды и растирают в фарфоровой ступке до получения гомогенной массы. Этого количества силикагеля достаточно для 5 пластинок размером 20 x 20 см с толщиной слоя 0,25 мм. Если используют носитель, содержащий сульфат кальция (кизельгель G), растирание и наслаивание его занимает не более 1—1,5 мин. Силикагель, не содержащий сульфата кальция (кизельгель Н), дает стабильный слой толщиной до 0,25 мм. Для хроматографии аминокислот и их производных используют пластинки, высушенные на воздухе без нагревания.

Для фракционирования ДНФ-аминокислот предложено несколько различных методик. Водо- и кислоторастворимые ДНФ-аминокислоты можно разделить с помощью одномерной хроматографии, используя в качестве растворителя смесь н-пропилового спирта и 37%-ного раствора NH4OH (7 : 3, по объему). Препарат наносят на пластинку в растворе уксусной кислоты или 0,5 н. НО,

однако до начала хроматографии необходимо удалить кислоту. Для этого хроматографическую пластинку перед нанесением нагревают до 60°С и наносят разделяемую смесь на горячий носитель.

Эфирорастворимые ДНФ-аминокислоты также могут быть разделены с помощью двумерной хроматографии на силикагеле в следующих системах растворителей: 1) толуол — пиридин — эти-ленхлоргидрин — 0,8 н. NH4OH (100 : 30 : 60 : 60), верхняя фаза используется в качестве элюента при хроматографии, нижняя — для предварительной обработки слоя носителя; 2) хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (70 : 30 : 3); 3) бензол — -пиридин — уксусная кислота (80 : 20 : 2); 4) хлороформ — метанол— уксусная кислота (95 : 5 : 1).

На первом этапе разделения используется система (1). Боковые стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой, смоченной в нижней фазе этого растворителя. Две стеклянные пластинки покрывают силикагелем и помещают в камеру так, чтобы слой геля был обращен к фильтровальной бумаге, но не контакти-' ровал с ней.

Пластинки оставляют в камере до следующего дня, извлекают из камеры и тотчас сверху прикрывают слой адсорбента другой стеклянной пластинкой таким образом, чтобы на одном конце первой пластинки оставалась незакрытой полоска шириной 15 мм. На нее как можно быстрее наносят фракционируемый материал и немедленно погружают пластинку в растворитель [верхняя фаза системы (1)]. После того как фронт растворителя пройдет 15 см, пластинку извлекают из камеры, 3 мин подсушивают на воздухе и вновь погружают в тот же самый растворитель. После второй хроматограг фии в том же направлении пластинку 10 мин подсушивают струей воздуха, на 10 мин помещают в термостат при 60°С и затем охлаждают в струе воздуха в течение 10—15 мин. После этого сразу же проводят разделение в перпендикулярном направлении. При использовании в качестве элюента систем растворителей (3) и (4) длительная горизонтальная хроматография продолжается 2—3 ч (см. рис. 46).

2. ФТГ-АМИНОКИСЛОТЫ

Тонкослойная хроматография на силикагеле оказалась весьма полезной для идентификации фенйлтиогидантоиновых производных аминокислот (ФТГ-аминокислот). Для предварительного определения этих соединений Бреннер и др. [4] рекомендовали двумерное разделение сначала в смеси хлорофюрм—метанол (9:1) и затем в смеси хлороформ — муравьиная кислота (100 : 5). Чтобы идентифицировать ФТГ-аминокислоты, на той же хроматографической пластинке фракционируют стандартные растворы известных аминокислот.

Хроматографию ФТГ-аминокислот можно проводить и в других растворителях. Пятна, образуемые аминокислотами, проявляются хлортолидиновым реактивом.

3. ДАНСИЛАМИНОКИСЛОТЫ

Очень чувствительным методом идентификации аминокислот является тонкослойная хроматография их диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных (гл. XIII). Для фракционирования их на силикагеле можно, например, воспользоваться следующими системами растворителей: хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (100 : 30 : 3); бензол — пиридин — уксусная кислота (80 : 20 : 2); 2-бутанон — пропионовая кислота — вода (15 : 5 : 6).

Применяя подходящие растворители и стандартные растворы дансиламинокислот, можно идентифицировать дансильные производные всех аминокислот. Вудс и Ванг [19] сообщили о том, что использование полиамидных слоев, связанных с полиэфирной подложкой, чрезвычайно эффективно при разделении дансиламино-кислот (гл. ХШ). Можно добиться вполне удовлетворительных результатов фракционирования с помощью двумерной хроматографии сначала в смеси вода — ?0%-ная муравьиная кислота (200 : 3), а затем в смеси бензол — ледяная уксусная кислота (9: 1).

Локализацию дансил аминокислот определяют на влажной хроматограмме по их собственной флуоресценции в ультрафиолете при 360 нм. Этот способ позволяет выявлять до 10~4 мкмоля дансил-аминокислот [15]. После высушивания хр

страница 97
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
запись к урологу в юао москва
никишина ирина петровна
панель а0 вывеска
банкетка с пластиковым сиденьем 460 х 1500 х 350 итог

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2017)