химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ухудшает воспроизводимость величины R^. Чтобы устранить этот источник артефактов, следует постоянно поддерживать в камере атмосферу насыщенных паров. Это достигается выстиланием стенок камеры фильтровальной бумагой, смоченной растворителем, или уменьшением до минимума объема хроматографнческой камеры (сэндвич-камер а).

Существует несколько способов дальнейшего улучшения разделения при тонкослойной хроматографии. Например, можно повторно подавать тот же самый растворитель на пластинку или, прервав хроматографию на определенном этапе, после того как разделяемые вещества уже мигрировали на некоторое расстояние, высушить пластинку и затем продолжать хроматографию с другим растворителем. Для длительной хроматографии Бреннером и др. [4J предложена специальная камера, представленная на фиг. 46. В этом приборе хроматографическая пластинка расположена горизонтально, а растворитель подается на один край пластинки с помощью фитилей из фильтровальной бумаги. Почти вся поверхность пластинки закрыта крышкой, за исключением полоски шириной 2 см на противоположном по отношению к сосуду с растворителем конце. Растворитель испаряется со свободной поверхности этого конца пластинки, чем обеспечивается постоянный ток элюента, и поэтому

хроматографию можно вести как угодно долго. |

Подобно хроматографии на бумаге, при тонкослойной хромата! графии также проводят разделение в двух направлениях под пря* мым углом друг к другу. В одном направлении, как правило^ проводят электрофорез в электрофоретической камере с малым объемом для испарения; контакт между слоем адсорбента и электрод^ ными отсеками в этих камерах обеспечивают фитили из фильтровальной бумаги. Из-за низкой теплопроводности стекла и связанным с этим слабым тепловым рассеянием может возникать проблема охлаждения хроматографической пластинки. Для снижения образования тепла рекомендуется работать на стеклянных пластинках минимальной толщины и применять буферные растворы по возможности минимальной ионной силы.

Полученные фракции проявляют, опрыскивая тонкий слой соответствующими реагентами. При работе на неорганических адсорбентах в качестве таких реагентов могут быть использованы вещества, обычно разрушающие бумагу, например сильные кислоты.

Проявленные хроматограммы, как правило, фотографируют. После опрыскивания специальным раствором полимеров (Neatan) слой адсорбента можно отделить от стекла и сохранить в качестве иллюстрирующего материала эксперимента.

А. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ

И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ

Для фракционирования аминокислот применяется хроматография в тонком слое силикагеля или целлюлозы. В отношении отдельных аминокислот для хроматографии на силикагеле характерна большая чувствительность, чем для хроматографии на целлюлозе, однако в тонком слое целлюлозы разделение лучше. В связи с этим ниже приводится метод Аркса и Неера [2] разделения аминокислот тонкослойной хроматографией на целлюлозе.

Приготовление слоя адсорбента. 8,0 г порошка целлюлозы MN 300 (фирма Macherey-Nagel, ФРГ) суспендируют в гомогенизаторе в смеси 48 мл дистиллированной воды и 2 мл этанола. Полученной суспензии достаточно для нанесения на 5 пластинок с толщиной слоя 0,25 мм. Пластинки с целлюлозой оставляют на ночь для подсушивания при комнатной температуре.

Для двумерного разделения используют 4 смеси растворителей, которые применяют в трех разных комбинациях: 1) н-бутиловый спирт — ацетон — диэтиламин — вода (10 : 10:2:5), 2) изопро-панол — муравьиная кислота — вода (40 : 2 : 10), 3) втор-бу-тиловый спирт — 2-бутанон (метилэтилкетон) — дициклогексила-мин — вода (10 : 10 : 2 : 5), 4) фенол — вода (75 : 25) в атмосфере 3°/о-ного NH4OH.

Растворитель (1) всегда применяют при разделении в первом, а любой из трех остальных растворителей — во втором направлении. Фракционирование проводят в обычной хроматографической камере, не выстилая ее стенок фильтровальной бумагой, смоченной растворителем. Растворитель наливают в камеру непосредственно перед опытом. Уровень растворителя должен быть на 15—20 мм ниже стартовой точки. Хроматографию продолжают до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет верхнего края пластинки. После этого пластинку высушивают 5—10 мин при 90°С или 12 ч при комнатной температуре. На втором этапе разделения рядом со стартовой точкой -наносят стандартную смесь аминокислот и помещают пластинку в камеру со второй смесью растворителей. По окончании хроматографии пластинку 20 мин высушивают при 90°С.

Полученные хроматограммы рекомендуется проявлять нингид-рин-коллидиновым реагентом (1,0 г нингидрина, растворенного в смеси 700 мл этанола, 29 мл 2,4,6-коллидина и 210 мл уксусной кислоты). При окрашивании этим реагентом можно обнаружить следующие минимальные количества аминокислот: 0,05 мкг для Ала, Асп и Вал; 0,1—0,2 мкг для Иле, Сер и Apr; 0,3—0,5 мкг для Гис, Лиз, Мет и Тир.

Найбом [13] на первом этапе разделения в тонком слое целлюлозы MN 300 проводил электрофорез в течение 15 мин в 0,7%-ной муравьиной кислоте при напряжении 400 В, а на втором

страница 96
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить букет сирени в москве недорого
Компания Ренессанс: наша лестница.ру - цена ниже, качество выше!
кресло клио цена
кладовка на новоалексеевской

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)