химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

осле элюирования колонку отмывают не менее чем двумя объемами раствора 0,01 М NH4OH и используют вновь. После 4—5 опытов фракционирования гель сефадекса необходимо извлечь из колонки и промыть раствором NH4OH. В связи с опасностью бактериального роста не рекомендуется держать колонку при комнатной температуре.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. В соответствии с механизмом гель-фильтрации при выборе марки (G-индекса) сефадекса следует руководствоваться предполагаемой величиной молекулярного веса пептидов. Если гидролизат содержит крупные пептиды, целесообразно использовать сефадекс G-50 или G-75. Если средняя величина молекулярного веса пептидов невелика, то предварительное фракционирование проводят на сефадексе G-25. Чем выше специфичность расщепления (например, при действии трипсина на ацетил- и трифтор ацетил белки или при расщеплений бромцианом), тем больше вероятность получения крупных пептидов. В этих случаях используется сефадекс с более высоким значением индекса G. При неспецифическом гидролизе (гидролиз химотрипсином, субтилизином, папаином, пепсином, кислотой и т. п.) обычно получаются мелкие пептиды, которые следует предварительно фракционировать на сефадексах с низким значением индекса G.

2. Из-за абсорбционных свойств сефадекса выход материала при фракционировании гидролизатов белка обычно равен 55—-60%.

3. С помощью измерения оптической плотности растворов при 280 нм могут быть обнаружены только пептиды, содержащие тирозин и триптофан. Для выявления пептидов, не имеющих в своем составе этих аминокислот, необходимо располагать другими методами определения пептидов. К ним относится, например, метод пря.

мой спектрофотометрии при 220 нм; поглощение при этой длине волны характерно для соединений с пептидными связями.

Трудоемким, но очень чувствительным методом анализа отдель* ных фракций может служить нингидриновая реакция. Из каждой фракции отбирают равные пробы объемом 0,2—0,3 мл, добавляют к ним по 1 мл 2,5 н. NaOH и инкубируют 3 ч при 90° С. Затем к каждой пробе добавляют по 1 мл 30%-ной уксусной кислоты, 0,25 мл 0,2%-ного раствора SnCl2 в 0,2 М нитратном буферном растворе и 0,25 мл 4%-ного раствора нингидрина в пропаноле. Пробы на 10 мин помещают в кипящую водяную баню при 100°С, затем к каждой, добавляют по 3 мл 50%-ного пропанола и определяют оптическую плотность при 570 нм.

4. Предварительное фракционирование на колонке с сефадексом очень удобно для выделения и очистки компонентов смеси, избирательно помеченных радиоактивными изотопами. В этом случае кроме определения концентрации пептидов спектрофотометрией или с помощью нингидриновой реакции, измеряют также радиоактивность полученных фракций в соответствующем приборе (в сцинтилля-ционном или других счетчиках).

5. Предварительное фракционирование с помощью полиакриламидного геля дает такие же результаты, как и гель-фильтрация на сефадексе. В отличие от природного декстранового геля, каким является сефадекс, полиакриламидный гель представляет собой гель синтетического полимера, обладающий чрезвычайно малыми абсорбционными свойствами. Поэтому разделение на полиакрила-мидном геле можно провести практически без потерь фракционируемого материала. .Молекулярный вес фракционируемых веществ также очень существен для разделения на полиакриламидном геле. Чем ниже молекулярный вес компонентов разделяемой смеси, тем меньше индекс биогеля, который целесообразно использовать для фракционирования.

Е. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НЕПРЕРЫВНО ПОВТОРЯЮЩЕЙСЯ

ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЕЙ

Принцип метода. Фракционируемый материал пропускают через одну и ту же колонку несколько раз; это позволяет разделить даже те компоненты смеси, которые не делятся на колонке обычной длины.

Область применения. Выделение и очистка белков.

МЕТОДИКА

]. Оборудование. Комплект приборов, выпускаемых фирмой LKB (Швеция) для непрерывно повторяющейся хроматографии под названием «Рецихром» (фиг. 42), состоит из следующих основных

частей: хроматографическая колонка, перистальтический насос и проточный абсорбциометр.

2. Хроматография. Исследуемый материал наносят на колонку с сефадексом, выбранным в соответствии с молекулярным весом разделяемых веществ. Поток элюента, как показано на фиг. 42,

Фиг. 42. Схема работы системы «Рецихром».

/ — хроматографическая колонка; 2 — охлаждающая рубашка; 3 — полиэтиленовый тонкостенный капиллярный шланг; 4 — проточная кювета абсорбциомет-ра; 5 — самописец; 6 — двухходовой распределительный кран; 7 — перистальтический микроиасос; 8 — воронка для заполнения колонки с соединительной муфтой.

устанавливают в нужном направлении соответствующим поворотом двухходового распределительного крана. Для подачи элюента на колонку снизу вверх в систему включен перистальтический насос. С помощью этой системы можно повторно пропускать фракционируемый образец через колонку. Оптическая плотность фракций непрерывно регистрируется самописцем. В процессе разделения белков при соответствующих поворотах распределительного крана сначала из препарата удаляют примесные (нежелательные

страница 94
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Бонус за клик по промокоду "Галактика" в КНС - ддр3 цена - онлайн кредит во всех городах России.
Фирма Ренессанс красивые лестницы в доме - продажа, доставка, монтаж.
противопожарный клапан с приводом okl-1k-60-200-o-s220-t-n
обучение вентиляция и кондиционирование

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.01.2017)