химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

достигается требуемая степень разделения.

3. Диаметр колонки. В колонках широкого диаметра (20—30 мм) «пристеночный» эффект в меньшей степени препятствует разделению, поэтому широкие колонки удобнее в работе и дают лучшие результаты, чем узкие (диаметром 10 мм и меньше) и длинные. Однако для аналитической гель-хроматографии целесообразно использовать колонки диаметром 10 мм.

4. Заполнение колонки. Проще всего можно заполнить колонку с помощью трубки равного с ней диаметра. Такой дополнительной трубкой следует удлинить колонку сверху примерно на одну треть ее высоты. На нижний конец колонки надевают пластмассовый капиллярный шланг такой длины, чтобы его конец можно было закрепить на 4—5 см ниже верхнего конца дополнительной трубки. Суспензии набухшего геля сефадекса дают отстояться и после этого удаляют избыток надосадочной жидкости, так чтобы оставшийся ее слой составлял примерно половину объема геля. Осторожно перемешав гель сефадекса, суспензию переливают по стеклянной палочке в колонку, удлиненную дополнительной трубкой. Рекомендуется по возможности залить в колонку в один прием весь необходимый объем суспензии. Затем сефадекс оставляют на 15—20 мин для оседания гранул и открывают кран, выпускающий буферный раствор. Скорость протекания буферного раствора при заполнении колонки должна быть ниже той скорости, которую устанавливают после нанесения препарата. Как только верхняя граница геля достигнет необходимого уровня, дополнительную трубку удаляют. Как до, так и после нанесения фракционируемого образца поверхность геля следует тщательно предохранять от повреждения. В длительных опытах постоянную скорость протекания элюента удобно поддерживать с помощью склянки Мариотта.

5. Краткое разъяснение некоторых терминов, используемых в литературе по гель-хроматографии,

Vt — общий объем столбика геля. (Рекомендуется определять общий объем геля, заполняя колонку водой и измеряя объем воды, а не с помощью вычислений, так как из-за

неровностей стенки в последнем случае результат может г

быть не точен.) \

Vc — внешний (свободный) объем, т. е. объем жидкости, заполняющей пространство между гранулами набухшего геля. (Его можно определить, хроматографируя на колонке вещество, не способное проникать в гранулы, например голубой декстран.)

У* — объем набухшего геля в колонке (Vt — V0).

V| — внутренний объем, т. е. объем растворителя, который находится в порах набухшего геля.

Ve — объем элюата, т. е. объем элюирующего раствора, необходимый для элюирования данного вещества.

Vs — объем разделения, т. е. объем элюирующего раствора, равный разности объемов элюатов двух разделяемых гель-хроматографией веществ.

Vt — емкость по воде, т. е. максимальное количество воды (в мл), поглощаемой 1 г сухого геля.

Д. ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ -ФЕРМЕНТАТИВНЫХ ГИДРОЛИЗАТОВ НА КОЛОНКЕ

С СЕФАДЕКСОМ G-50

При специфическом ферментативном гидролизе или химическом расщеплении любого белка среднего молекулярного веса получает-?ся довольно сложная смесь пептидов. Выделение и очистка всех пептидов, из которых состояла полипептидная цепь и которые содержатся в нефракционированном гидролизате, — задача достаточно трудная. Поэтому гидролизат белка рекомендуется сначала подвергнуть предварительному разделению. Среди современных методов фракционирования наиболее подходящим для этой цели является гель-фильтрация.

1. Обработка сефадекса G-50. Сефадекс суспендируют в il0-кратном объеме 0,01 М NHjOH, перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре и оставляют для отстаивания. После этого яадосадочную жидкость, содержащую мелкие частицы геля, декантируют, а суспендирование и отстаивание повторяют. Затем гель сефадекса суспендируют в 3-кратном объеме 0,01 М NH4OH и загружают в колонку, через которую пропускают 5 объемов 0,01 М NH4OH.

2. Выбор размеров колонки. Предварительное фракционирование 100 —200 мг гидролизата проводят на колонке размером 1,5 X 150 см.

3. Подготовка материала для фракционирования. Фракционируемый материал следует наносить на колонку в минимальном объеме. 100—200 мг гидролизата обычно растворяют в 3—5 мл 0,01 М NH4OH.

4. Нанесение образца. Открыв выходное отверстие колонки, выпускают избыток буферного раствора, так чтобы его уровень был всего лишь на 1 мм выше уровня геля сефадекса, Затем, касаясь загнутым концом пипетки стенки колонки, круговыми движениями руки наслаивают на сефадекс раствор фракционируемого материала. После этого кран выходного отверстия колонки вновь открывают и дают возможность нанесенному препарату медленно войти в гель. Остаток препарата смывают тремя порциями 0,01 М NH4OH по 1 мл. Верхнюю часть колонки заполняют 0,01 М NH4OH и соединяют колонку со склянкой Мариотта или насосом.

5. Элюирование. Элюирование производят 0,01 М NH4OH со скоростью 300 мл/ч И собирают фракции по 3—5 мл. Фракции объединяют в соответствии с кривой оптической плотности элюата при 280 нм, полученной на «Увикорде» или после измерений в спектрофотометре. Объединенные фракции лиофилизируют.

П

страница 93
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
компьютерный стол ср 420 130
http://taxi-stolica.ru/nashi_avtomobili/avtobusi/
косметология цена
ремонт мультизональных vrf систем кондиционирования

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.07.2017)