химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

емые соединения элюируются двумя фракциями. Одна фракция (в данном случае высокомолекулярные соединения — белки) элюируется в свободном объеме. Другая — содержащая низкомолекулярные соединения — проникает в частички геля и поэтому в процессе элюирования выходит из колонки значительно позже, хорошо отделяясь от первой.

2. При групповом разделении смеси высокомолекулярные соединения не фракционируются. Гель-фильтрация в данном случае, подобно диализу, используется для отделения белков от низкомолекулярных примесей и может заменить его. Обессоливание белков можно проводить на сефадексах G-25 и G-50, а также на биогелях Р6 и РЮ. Для обессоливания пептидов следует применять: сефадексы G-10 и G-15 или биогели Р2 и Р4.

3. Для группового разделения целесообразно использовать короткие хроматографические колонки длиной 20—30 см. Объем геля должен не менее чем в 4 раза превышать объем обессоливаемого раствора.

Б. КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ БЕЛКОВЫХ РАСТВОРОВ С ПОМОЩЬЮ СЕФАДЕКСА

Принцип метода. Сухой сефадекс, добавленный к раствору который нужно сконцентрировать, благодаря высокой гидрофиль-ности интенсивно поглощает воду; при этом остающиеся в растворе высокомолекулярные соединения концентрируются.

Область применения. Концентрирование фракций, полученных'

при хроматографии, белков, выделенных другими методами фракционирования, биологических жидкостей и т. д. '

МЕТОДИКА

К раствору, который должен быть сконцентрирован, добавляют сухой сефадекс G-25 (крупнозернистый), суспензию тщательно перемешивают и через 10 мин. центрифугируют или фильтруют. Каждый грамм сухого сефадекса G-25 поглощает примерно 2,5 г воды. После обработки сефадексом фильтрат или надосадочная жидкость становятся благодаря этому более концентрированными, чем исходный раствор, а рН и ионная сила их практически не меняются.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Однократное проведение описанной процедуры позволяет сконцентрировать раствор примерно в Зраза. Если необходимо дальнейшее концентрирование, то процесс повторяют со свежей порцией сухого сефадекса.

2. Отмытый и высушенный сефадекс можно вновь использовать для концентрирования растворов.

В. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЕЙ

Принцип метода. На колонке с сефадексом G-200 фракции белков сыворотки разделяются в соответствии с их молекулярным весом.

Область применения. Фракционирование белковых смесей и очистка выделенных белковых фракций.

МЕТОДИКА

/. Подготовка колонки с сефадексом G-200. Размер колонки 3x80 см. Сефадекс G-200 суспендируют в 0,1 М трис-HCl рН 8,0. содержащем 0,2 М NaCl, и на сутки оставляют для набухания. Мелкие плавающие в надосадочной жидкости частицы удаляют декантацией. На дно колонки кладут фильтр из бумаги или стеклянную вату и наполняют колонку на 1/3 высоты буферным раствором. Сначала в колонку вносят порцию сефадекса G-25, образующего слой высотой 2 см (сефадекс G-25 должен быть предварительно оставлен на сутки в буферном растворе для набухания)* Затем начинают заполнять колонку разбавленной суспензией сефадекса G-200 и через несколько минут оседания открывают выходное отверстие. По мере вытекания, буферного раствора продолжают заполнение колонки суспензией сефадекса, следя за тем, чтобы образующиеся при заполнении пузырьки воздуха не задерживались в столбике геля. Когда образуется столбик геля требуемой высоты, через колонку пропускают один объем буферного раствора.

2. Нанесение сыворотки. Открывают выходное отверстие колонки и выпускают буферный раствор до тех пор, пока его уровень в верхней части колонки не достигнет уровня геля. Затем осторожно, чтобы не взмутить верхний слой геля, на сефадекс наслаивают 4— 5 мл сыворотки, предварительно в течение 1 ч диализованной против буферного раствора. После того как нанесенный препарат войдет в гель, его остатки смывают тремя порциями буферного раствора по 4 мл.

3. Элюирование. Для элюирования через колонку пропускают в общей сложности 700 —800 мл буферного раствора со скоростью 40—60 мл/ч и собирают фракции по 5 мл. Оптическую плотность элюата регистрируют либо непрерывно с помощью «Увикорда», либо спектрофотометрией каждой отдельной фракции при 280 нм.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Белки сыворотки элюируются из колонки с сефадексом G-200 тремя отдельными фракциями. В первую фракцию (соответствующую первому пику) входят высокомолекулярные белки, такие, как макроглобулин и липопротеиды. Вторая фракция (соответствующая второму пику) содержит белки, близкие по молекулярному весу к IgG, а именно иммуноглобулины G и А. В третьей фракции (соответствующей третьему пику) элюируются белки с меньшим молекулярным весом, такие, как альбумин и трансферрин. При фракционировании сывороток больных миеломами IgG- или IgA-типа второй пик получается очень большим. Увеличение же первого пика характерно для макроглобулинемии Вальденштрёма.

2. Для предохранения верхнего слоя геля от взмучивания во время нанесения препарата на поверхность геля можно положить кружок фильтровальной бумаги. При гель-фильтрации на сефадексах G-75, G-100, G-150 и

страница 91
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Купить коттедж в поселке Шульгино без охраны
белоусово вентиляторы из стеклопластика
выбор биксеноновых линз
grundfos sp 9-16

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.02.2017)