химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

бменника. В каждом конкретном случае рекомендуется в предварительных опытах определить оптимальные размеры колонки. Практика показывает, что для получения хороших результатов высота колонки должна относиться к ее диаметру как 10:1.

11. Набухшие ионообменники можно хранить в виде суспензии в нейтральных растворах в течение нескольких месяцев даже при комнатной температуре, если принять меры предосторожности против бактериального заражения. В суспензии КМ- и сульфоэтил-сефадекса (СЭ-сефадекс) добавляют 0,02% азида натрия» а в суспензию ДЭАЭ-сефадекс а — 1 % бутанола.

Г. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ БЕСКОЛОНОЧНОГО ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ НА ДЭАЭ-СЕФАДЕКСЕ

При соответствующих условиях ДЭАЭ-сефадекс связывает все белки сыворотки, за исключением фракции IgG. Поэтому фракционирование белков выворотки с помощью этого ионообменника очень удобно для выделения иммунохимически чистого IgG, а также полезно при дальнейшей очистке препаратов IgG, полученных другими способами.

Суть бесколоночного метода заключается в следующем. Фракционируемую сыворотку смешивают с уравновешенным соответствующим буферным раствором ДЭАЭ-сефадексом, который связывает почти все сывороточные белки, оставляя в растворе IgG, легко отделяемый при отмывании. Смешивание с ДЭАЭ-сефадексом повторяют дважды (каждый раз со свежей порцией ионообменника) и в результате получают препарат IgG, свободный от примеси других белков сыворотки, о чем судят по иммуноэлектрофоретическому анализу. Благодаря тому что фракция IgG совсем не связывается с ионообменником, белки этого класса удается выделить почти количественно в нативном состоянии, не опасаясь денатурации, что является большим преимуществом данного метода по сравнению с другими методами выделения IgG.

МЕТОДИКА

ДЭАЭ-сефадекс обрабатывают так же, как и для колоночной хроматографии, затем уравновешивают 0,01 М фосфатным буферным раствором рН 6,5. Когда уравновешивание закончится, буферный раствор удаляют, насколько это возможно, так, чтобы ионообменник оставался едва влажным. Удобнее всего это сделать, поместив ДЭАЭ-сефадекс на выстланную фильтровальной бумагой воронку Бюхнера и пропуская через него буферный раствор под вакуумом, создаваемым водоструйным насосом.

Фракционируемую сыворотку (1—30 мл) наливают в химический стакан, добавляют к ней необходимое количество влажного ионообменника и перемешивают до получения гомогенной суспензии. Смесь оставляют при 4° С на 1 ч и затем переносят на фильтровальную бумагу, выстилающую воронку Бюхнера. Гель промывают холодным 0,01 М фосфатным буферным раствором рН 6,5 до тех пор, пока в элюате не перестанет обнаруживаться белок (в реакции с суль-фосалициловой кислотой). Собранный буферный раствор, содержащий белок, смешивают со свежей порцией ДЭАЭ-сефадекса, полученную суспензию вновь оставляют при 4° С на 1 ч и снова, как описано выше, отмывают белок, не связавшийся с ионообменником. Отмывающий буферный раствор, который в данном случае уже содержит только чистый IgG, можно лиофилизировать или сконцентрировать диализом под давлением.

Рекомендуемая литература

Determann H.t Gel Chromatography, Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, 1968. (Г. Детерман, Гель-хроматография, изд-во «Мир», М., 1970).

Leach S. J.t Physical Principles and Techniques of Protein Chemistry, Academic, Press, New York, London, 1969.

Williams C. A., Chase M. W., Methods in Immunology and Immunochemistry, Vol. II, Academic Press, New York, London, 1968.

Глава X

ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

А. ОБЕССОЛИВАНИЕ БЕЛКОВЫХ РАСТВОРОВ НА КОЛОНКЕ

С СЕФАДЕКСОМ

Принцип метода. Содержащиеся в белковых растворах соли как низкомолекулярные вещества при гель-фильтрации проникают в частицы геля, и поэтому их миграция в геле замедляется- В то же время белки благодаря высокому молекулярному весу без задержки проходят через колонку с гелем сефадекса вместе с фронтом элюата.

МЕТОДИКА

/. Подготовка колонки. Для обессоливания 100 мл белкового раствора необходимо примерно 25 г сухого сефадекса G-25. Объем раствора, из которого требуется удалить соли, должен быть не более однбй пятой объема геля, заполняющего колонку.

Сухой сефадекс суспендируют с перемешиванием в 0,05М трис-буфере рН 7,2. После оседания частичек геля надосадочную жидкость, которая иногда может быть мутной, декантируют. Суспенди-рование в свежих порциях буферного раствора и отстаивание повторяют до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. 'Затем суспензию заливают в колонку, некоторое время ждут, пока "осядут частички геля, и после этого открывают выходное отверстие "из колонки для того, чтобы выпустить буферный раствор, уровень которого должен достичь уровня сефадекса.

2. Обессолившие. Белковый раствор пропускают через гель сефадекса. Содержание белка в обессоленных фракциях определяют "либо по оптической плотности при 280 нм, либо в реакции осаждения белка трихлоруксусной кислотой.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Обессоливание является одной из форм группового разделения, при котором фракциониру

страница 90
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ирисы букет
Рекомендуем фирму Ренесанс - лестницы просто. ру - всегда надежно, оперативно и качественно!
кресло ch 838
Удобно приобрести в КНС Нева моноблок Acer купить - офис в Санкт-Петербурге, ул. Рузовская, д.11, КНС Нева.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)