химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

отовив антисыворотки, специфичные к какому-либо одному-единственному белку (или небольшому числу белков), можно в смеси белков исследовать составляющие ее отдельные компоненты. Иммунные сыворотки, предназначенные для иммунохимического анализа отдельных белков плазмы человека, уже имеются в продаже.

В их числе можно найти антисыворотки к фракциям альбумина, ct-1-, а-2-липопротеидов, а-2-макроглобулин-трансферрина, IgG, IgM, IgA и т. д. Очевидно, располагая соответствующими фракциями нативных белков и владея методами получения антисывороток, можно, учитывая запросы экспериментальных исследований, значительно расширить ассортимент имеющихся в продаже препаратов.

4. ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ

Ионообменные смолы имеют ограниченное применение в хрома-тографическом анализе белков. При взаимодействии со смолами высокомолекулярные лабильные белки легко подвергаются денатурации и необратимо связываются сними. Более того, емкость смол по отношению к белкам сравнительно низка, а чистота разделенных фракций не вполне удовлетворительна. Поэтому ионообменные смолы используются в белковой химии в основном для очистки глобулярных белков, имеющих относительно низкий молекулярный вес.

В последние годы вместо ионообменных смол при работе с белками применяют производные углеводов, в которые соответствующими методами введены ионизированные группы. К таким производным углеводов относятся ионообменные целлюлозы и ионообменные полимеры декспграна (сефадекс). По сравнению с ионообменными смолами эти ионообменники имеют определенные преимущества. Их гидрофильный матрикс очень хорошо связывает воду; в результате они весьма интенсивно набухают в водной среде, что обеспечивает лучшие условия проницаемости для крупных белковых молекул по сравнению со смолами, имеющими гидрофобные сшивки. Новые ионообменники обладают более высокой емкостью по отношению к белкам и не вызывают их денатурации. Сорбированные на этих ионообменниках белки обычно элюируются в условиях, при которых они стабильны.

В табл. 1 приведены важнейшие свойства наиболее распространенных ионообменников.

Таблица 1

Наиболее употребительные ионообменные целлюлозы

Тип Название Сокращенное обозначение РК рМ элю-ирования Функциональные группы, участвующие в ионном обмене Буфер

белок ионообменник

Аннонит

Катионит Катионнт Диэтил-амннозтилцел-люлоза

Фосфоцеллю-лоза

Карбок-снметил-целлю-лоза ДЭАЭ-целлю-лоза

Ф-целлюлоза

КМ-целлюлоза 8,0

6,7 4,0 8,0—5,0

4,0—7,0 4,5-8,0 -соон

—NH2 —NH2 _N+-Н(СН2-СН3)2РОГ<° Фосфатный

>>

Ацетатный

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины Rf от 0 до 1. Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюи-рующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных рН и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина рН равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении рН буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении рН. В том и другом случае с изменением рН можно увеличивать ионную силу. Изменение рН и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование).

Следует отметить, что градиентное элюирование имеет определенные преимущества по сравнению со ступенчатым. При нем изменение среды происходит постепенно без резких скачков, которые во время ступенчатого элюирования могут стать причиной артефактов. Например, если слишком рано ввести новый буферный раствор, медленно мигрирующая часть белков из предыдущей ступени элюирования выйдет из колонки, имитируя новый пик.

Устройство приборов для хроматографии и осуществление самого эксперимента сравнительно просты. Выбрав подходящую систему ионного обмена и проведя рекомендованную обработку (регенерацию) ионообменника, при идентичных условиях элюирования (скорость потока, температура и т. д.) можно получать хорошо воспроизводимые хроматограммы. Благодаря этому фракционирование белков с помощью ионообменной хроматографии имеет широкое распространение.

Как и в предыдущих разделах, мы попытаемся кратко рассмотреть применение ионообменной хроматографии на примере изучения белков сыворотки. До сих пор наиболее популярным методом разделения сывороточных белков является хроматография на колонке анионообменной ДЭАЭ-целлюлозы по методу Собера и Петерсона [18]. Предложено несколько модификаций этого метода. Фракции сыворотки элюируются с колонки различными способами градиентного элюирования и выходят обычно в следующем порядке: IgG (как правило, имеет несколько пиков), р-, а-глобулины и затем альбумин. Этот метод особенно эффективен для приготовления препарат

страница 9
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
real flame barrie
подкрылки lifan x-60 купить
скаволини кухни вакансии
Купить квартиру в жилом комплексе Малая Дмитровка д.23/15 стр.2

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.01.2017)