химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ают и продолжают постепенно заполнять колонку ионообменником до нужной высоты. После этого проверяют, уравновешена ли колонка; если равновесия нет, ее продолжают промывать

стартовым буферным раствором до тех пор, пока рН вытекающей

жидкости не будет равен рН стартового буферного раствора.

в. Подготовка системы для градиентного элюирования. В качестве смесителя используют колбу на 0,5 л со стартовым буферным раствором (0,02 М фосфатный буфер рН 8,0). Резервуар, образующий замкнутую систему со смесителем, представляет собой сосуд объемом 1 л, заполненный 0,3 М буферным раствором. Непрерывную подачу буферного раствора на колонку осуществляют с помощью насоса. Открыв выходное отверстие, понижают уровень буферного раствора в колонке до уровня геля. Затем на ионообменник аккуратно, стараясь не взмутить верхний слой геля, наносят фракционируемую сыворотку, которую предварительно в течение суток диа-лизуют против стартового буферного раствора. Нанесенный образец смывают тремя порциями стартового буферного раствора по 2 мл и приступают к хроматографии. Для фракционирования 3 мл сыворотки требуется колонка ДЭАЭ-сефадекса размером 2x50 см;.

4. Хроматография. Хроматографию проводят так же, как описано для колонки с ДЭАЭ-целлюлозой (см. стр. 209).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Закончив хроматографию, гель сефадекса сразу же извлекают из колонки и регенерируют. Прежде всего нужно удалить белки, которые, по всей вероятности, остаются адсорбированными на ионот обменнике. Это достигается отмыванием геля в 1 М Na2HP04 с пос-ледующим отмыванием дистиллированной водой до нейтральной реакции (до рН дистиллированной воды). После этого гель ионообменника уравновешивают стартовым буферным раствором.

2. Емкость ДЭАЭ-сефадекса обычно составляет 3 мэкв/г. В соответствии с этим на колонку ДЭАЭ-сефадекса, приготовленную из 1,0 г сухого ионообменника, можно нанести 3 мл сыворотки.

3. При уменьшении ионной силы буферного раствора ионообменные сефадексы очень сильно набухают, поэтому не рекомендуется применять растворы, ионная сила которых ниже 0,05—0,1. Если хроматографию начинают в слишком разбавленном буферном растворе, то при последующем значительном увеличении ионной силы элю-ирующего буферного раствора происходит уменьшение объема гранул сефадекса, которое может вызвать образование полостей в колонке геля. Образование полостей нарушает равномерное протекание жидкости через колонку и неблагоприятно отражается на результатах хроматографии.

* 4. Рекомендуется проводить регенерацию геля ДЭАЭ-сефадекса после извлечения его из колонки и перед каждым опытом заполнять колонку вновь; благодаря этим операциям гель становится гомогенным.

5. Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе очень удобна для выдег ления из сыворотки IgG и для разделения белков этой фракции, обладающих разной электрофоретической подвижностью. Стартовый буферный раствор сначала вымывает из колонки IgG, имеющие низкую электрофоретическую подвижность. Быстро мигрирующие белки этого же класса выходят только при градиентном элюи-ровании. Хроматография.на ДЭАЭ-сефадексе является также общепринятой методикой очистки миеломных IgG.

6. Для катионообменной хроматографии можно использовать КМ-сефадекс G-50. Его предварительную обработку следует проводить так же, как и ДЭАЭ-сефадекса, с той лишь разницей, что КМ-сефадекс сначала обрабатывают 0,5 н. НС1, а затем отмывают щелочью. Прбцедура хроматографии на КМ-сефадексе G-50 та же, что и на КМ-целлюлозе.

7. По размеру пор ионообменные сефадексы подразделяются на два вида и имеют индексы 25 и 50. Ионообменник с индексом 25

имеет поры меньшего размера, чем сефадекс с индексом 50. Как и при гель-фильтрации, размер пор определяет величину молекул, которые могут диффундировать в гранулы сефадекса. Поэтому для разделения веществ с молекулярным весом меньше 10 ООО используют сефадексы с индексом 25, а для разделения веществ с более высоким молекулярным весом применяют сефадексы с индексом 50. Очень большие молекулы не могут проникнуть внутрь гранул сефадекса и адсорбируются на их поверхности. Для фракционирования соединений большого молекулярного веса можно использовать ионообменные сефадексы с любым размером пор.

8. Ионообменные сефадексы производятся в виде гранул диаметром 40—120 мкм, шарообразная форма которых обеспечивает высокую скорость протекания жидкости через колонку. Однако не следует забывать, что набухшие гранулы сефадекса легко подвергаются деформации. Поэтому попытка увеличить скорость протекания повышением давления подаваемого на колонку раствора выше определенного предела может, наоборот, привести к ее уменьшению.

9. рН и ионная сила буферного раствора также влияют на процесс набухания гранул сефадекса и, следовательно, на скорость протекания жидкости через колонку. Для этих параметров следует подобрать такие значения, чтобы максимальное набухание сефадекса или его сжатие не нарушало бы процесса хроматографии.

10. Для оптимального фракционирования очень важно правильно рассчитать количество загружаемого в колонку ионоо

страница 89
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Купить коттедж в поселке Иславское без бассейна
перевернуть игру что значит
Paoli Martines
nr230a belimo

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.02.2017)