химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

нейтральной реакции КМ-целлюлозу в Н+-форму, ее суспендируют в 0,5 н. HCI и перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Суспензию оставляют отстаиваться, декантируют надосадочную жидкость и вновь повторяют обработку кислотой. После этого КМ-целлюлозу отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции, как описано в предыдущем разделе.

4) КМ-целлюлоза в Н+-форме может храниться в виде водной суспензии при 4°С. '

Б. Выбор размеров колонки. Для фракционирования 100 мг белка или полипептида при использовании КМ-целлюлозы, имеющей емкость 0,7—0,8 мэкв/г, требуется колонка 1,5x35 см. Препаративное разделение 1,0 г белка можно проводить на колонке 3,5 х 45 см.

B. Скорость протекания жидкости через колонку. Скорость протекания определяется свойствами КМ-целлюлозы. В колонке волокнистой или гранулярной целлюлозы размером 1,5x35 см она

достигает 60 мл/ч. Чтобы получить хорошее разделение при хроматографии на сферической КМ-целлюлозе, следует несколько уменьшить скорость протекания.

Г. Подбор условий хроматографии. Можно применять как ступенчатое, так и градиентное элюирование. Ступенчатое элюирование удобно только в тех случаях, когда компоненты фракционируемой смеси элюируются при существенно различающихся значениях рН и молярности элюента.

. Градиентное элюирование можно осуществлять тремя способами: 1) увеличивать молярность элюента при постоянном рН, 2) менять рН элюента при постоянной молярности, 3) вести элюирование в градиенте как рН, так и молярности элюента.

Выбор оптимальных условий,фракционирования в каждом данном случае делается на основании предварительных опытов хроматографии. Однако, как правило, для фракционирования природных полимеров с катионными свойствами, таких, как полипептиды и белки, удобнее градиентное элюирование с увеличением молярности элюента при постоянном рН.

Хроматографию на КМ-целлюлозе можно начинать как в Н+-, так и в NH^-форме катионообменника. Перевод КМ-целлюлозы в Н+-форму описан выше. Перевод катионообменника из Н+-формы в КН4"Ф°РМУ производят следующим образом.

КМ-целлюлозу в Н+-форме суспендируют в 5-кратном количестве 0,1 М раствора ацетата аммония рН 4,6 и в течение 30 мин в химическом стакане перемешивают суспензию при комнатной температуре. После оседания частичек целлюлозы надосадочную жидкость декантируют и описанную процедуру повторяют еще три раза. Затем суспензией целлюлозы в том же растворе заполняют колонку и после соответствующего уплотнения отмывают ее 0,01 М буферным раствором до тех пор, пока рН и электропроводность элюата не станут равными этим же показателям элюента.

Д. Хроматография на колонке с КМ-целлюлозой в Н+-форме с помощью градиентного элюирования. Колонку 1,5 х 35 см заполняют КМ-целлюлозой в Н*-форме и промывают дистиллированной водой,

100 мг фракционируемого материала растворяют в 3—5 мл 0,01 М аммоний ацетатного буферного раствора рН 4,6. Удалив слой дистиллированной воды над КМ-целлюлозой в колонке, пипеткой, имеющей загнутый конец, круговыми движениями руки наносят исследуемый раствор на ионообменник. После того как нанесенный раствор войдет в КМ-целлюлозу, его остатки аккуратно смывают тремя порциями буферного раствора по 1 мл.

Через колонку пропускают 1,5 объема (относительно объема ионообменника) 0,01 М аммонийацетатного буферного раствора и начинают градиентное элюирование при постоянном рН 6,7, увеличивая молярность от 0,01 до 0,5 М, а затем при необходимости от 0,5 до 1,0 М.

Для создания градиента в соединенный с колонкой смеситель и в резервуар наливают по 100 мл аммонийацетатного буферного раствора рН 6,7 с молярностями 0,01 и 0,5 М соответственно. Устанавливают скорость протекания 1 мл/мин и после того, как через колонку пройдет 200 мл элюента, если это необходимо, начинают элюирование вторым градиентом молярности, повышая ее от 0,5 до 1,0 М.

Полученные фракции элюата объединяют в соответствии с оптической плотностью при 280 нм (или кривой непрерывной регистрации оптической плотности).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Основное преимущество используемого аммонийацетатного буферного раствора заключается в его летучести, благодаря которой обессоленные фракции можно получать без диализа лиофили-зацией. Кроме того, этот буферный раствор можно использовать в широком интервале рН. Вместе с тем для хроматографии на КМ-цел-люлозе можно применять и другие буферные растворы.

2. Для хроматографии используется волокнистая, гранулярная и сферическая КМ-целлюлоза. Волокнистую и гранулярную КМ-деллюлозу из-за высокой абсорбционной активности нельзя регенерировать непосредственно в колонке. По окончании хроматографии приходится извлекать ионообменник из колонки и по мере накопления достаточных количеств подвергать регенерации. Производные целлюлозы подвержены бактериальному заражению, поэтому собираемую для регенерации КМ-целлюлозу следует хранить при 4° С.

3. Абсорбционная способность сферической КМ-целлюлозы весьма невелика, поэтому после 2—4 опытов по фракционированию ее можно регенерировать в колонке.

4. Для пре

страница 87
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
металлочерепица купить курск
котлы на дизтопливе для отопления частного дома
мастер маникюра и педикюра +наращивание курс с нуля в москве
курсы менеджера по продажам сзао

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)