химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

например с помощью «Увикорда» фирмы LKB, либо спектрофотометрией каждой

фракции при 280 нм.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Хроматографию сыворотки можно проводить при комнатной температуре, однако все же лучше колонку охлаждать.

2. По нашим данным, емкость различных препаратов ДЭАЭ-целлюлозы может вообще существенно различаться, а также изменяться после регенерации. Поэтому в каждом случае приходится применять колонки разных размеров и наносить разное количество белка. В связи с этим рекомендуется в предварительном опыте с данным препаратом ионообменника определить наиболее подходящие условия хроматографии.

3. Регенерируют ДЭАЭ-целлюлозу так же, как и при подготовке ее к фракционированию сыворотки (см. стр. 209).

4. Проще всего идентифицировать белковые компоненты сыворотки, содержащиеся в разных фрациях элюата, с помощью иммуноэлектрофореза. В вышедшем со стартовым буферным раствором первом пике обычно содержится значительная часть сывороточного IgG; за ним выходят остальные фракции у-глобулина, |3 - и а-глобулины, и последним элюируется альбумин.

5. Если градиентное элюирование проводить так, как это описал Фехий, то в смеситель заливают 0,1 Мфосфатный буферный раствор рН 8,0, а в резервуар — 0,3 М фосфатный буферный раствор рН 8,0.

6. Непрерывную подачу буферного раствора с постоянной скоростью лучше всего можно осуществить с помощью подходящих насосов. Хорошо себя зарекомендовали используемые для этой цели насосы фирмы LKB: «Минифлоу», «Перистальтический» и «Перпекс».

7. Концентрирование белковых фракций с помощью диализа под

давлением. Для этой цели используют трубки из диализной мембраны диаметром 8 мм (трубка «Вискинг» фирмы Scientific Instrument

Centre Ltd). Трубку соответствующей длины смачивают дистиллированной водой, и один конец завязывают двойным узлом. Чтобы

проверить герметичность нижнего узла, трубку погружают в воду

и надувают воздухом. Верхний конец диализной трубки пропускают

через отверстие в резиновой пробке и надевают на конец воронки

соответствующих размеров, затем воронку с надетой диализной трубкой вставляют в отверстие резиновой пробки. Концентрируемый

раствор белка через воронку заливают в диализную трубку, легким

нажатием изгоняют пузырьки воздуха и помещают заполненную

трубку в вакуумную колбу Бунзена подходящих размеров так, чтобы пробка, через которую проходит конец воронки, плотно входила

в горло колбы. Герметичность контакта резины со стеклом можно

проверить, нанеся несколько капель воды по краю пробки.

Вакуумную колбу соединяют с водоструйным насосом и создают разрежение. Под вакуумом происходит фильтрация растворителя через диализную мембрану внутрь колбы и начинается концентрирование раствора белка. На выходной шланг вакуумной колбы накладывают зажим, чтобы сохранить разрежение, и всю систему помещают в холодильник или в холодную комнату. Если объем концентрируемого раствора больше объема воронки, то по мере концентрирования раствор белка подливают. Когда объем раствора уменьшится до нужной степени, вакуумную колбу с диализной трубкой извлекают из холодильника, открывают зажим и вынимают трубку из колбы. Затем надрезают мембрану и переливают сконцентрированный белковый раствор в соответствующий сосуд, смыв туда же небольшим количеством буферного раствора остатки со стенок диализной трубки.

1 Одним из наиболее быстрых и удобных методов концентрирования белковых растворов является мембранная фильтрация (см. стр. 27). — Прим. ред.

8. Концентрирование растворов с помощью лифогеля. Лифогель,

изготовляемый фирмой Gelman Instrument Company (США), представляет собой полиакриламидный гель, с помощью которого можно

концентрировать растворы высокомолекулярных веществ. Каждый

грамм лифогеля способен связать до 5 г воды, причем равновесие

устанавливается в течение 5 ч. Концентрируемый раствор помещают

в сосуд соответствующего размера и прибавляют столько лифогеля,

сколько требуется для того, чтобы была достигнута необходимая

концентрация (при этом нужно иметь в виду, что 1 г лифогеля,

набухая в водной среде, занимает объем 25 мл). Когда концентрирование закончится, набухший лифогель легко удаляют фильтрованием. После высушивания при 65°С его можно использовать вновь1.

Б. ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ НА КОЛОНКЕ С КАТИОНООБМЕННОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

1. КМ-ЦЕЛЛЮЛОЗА

A. Подготовка КМ-целлюлозы для хроматографии. Перед хроматографией КМ-целлюлозу следует обработать следующим образом:

1) Нужное количество целлюлозы в течение 15 мин перемешивают при комнатной температуре с 5-кратным количеством 0,5 М NaOH. После оседания частиц ионообменника надосадочную жидкость декантируют.

2) Обработанную щелочью КМ-целлюлозу отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции. Гранулярную или волокнистую целлюлозу рекомендуется отмывать с помощью центрифугирования или фильтрованием на воронке Бюхнера. Сферическая КМ-целлюлоза при отстаивании суспензии оседает очень быстро, поэтому ее можно отмывать декантацией в химическом стакане.

3) Чтобы перевести отмытую до

страница 86
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://help-holodilnik.ru/info/Remont_xolodilnikov_v_Solncevo
баннеры для кафе
урны для мусора для помещений
домашние кинотеатры для загородного дома

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.08.2017)