химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

мочевину, содержащуюся в полученных фракциях, удается удалить диализом. После 72 ч диализа в растворе остается не более 1—5% ее первоначального содержания. Если данная фракция растворима в воде, ее освобождают от мочевины гель-фильтрацией. Не растворимый в воде белок можно освободить от мочевины, промывая выпавший при диализе осадок несколько раз дистиллированной водой с помощью центрифугирования.

После этой операции водную суспензию нерастворимого белка лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Порошкообразную или волокнистую ДЭАЭ-целлюлозу нельзя регенерировать в колонке. По окончании хроматографии ионообменник извлекают из колонки и хранят на холоду. Когда накапливается достаточное количество использованной ДЭАЭ-целлюлозы, ее регенерируют, как описано выше.

2. В связи с опасностью бактериального прорастания не следует оставлять колонку регенерированного, готового к фракционированию ионообменника при комнатной температуре.

3. Подготовка колонки, заполненной сферической ДЭАЭ-цел-люлозой (полимер в виде шариков), не отличается от подготовки колонки с гранулярной или волокнистой целлюлозой. Использование сферической ДЭАЭ-целлюлозы имеет ряд весьма существенных преимуществ, несмотря на несколько меньшую разрешающую способность:

1) Скорость протекания жидкости через колонку со сферической ДЭАЭ-целлюлозой постоянна, и во время хроматографии не происходит усадки ионообменника.

2) Заполнение колонки сферической ДЭАЭ-целлюлозой весьма просто; гомогенный столбик ионообменника получить довольно легко.

3) В отличие от других типов ионообменника, которые весьма прочно связывают денатурированные белки, сферическая ДЭАЭ-цел-люлоза обладает меньшей абсорбционной способностью и благодаря этому ее можно регенерировать в колонке.

4) Простота заполнения колонки, постоянная скорость протекания жидкости через ионообменник и несложный процесс регенерации делают сферическую ДЭАЭ-целлюлозу пригодной для использования в больших препаративных колонках.

Рекомендуемая литература

Block Н. J., Boiling D., The Amino Acids Composition of Proteins and Foods.

Analytical Methods and Results, Springfield, Thomas Publ., 1951. Smith I., Chromatographic and Electrophoretic Techniques, Vols 1 and 2,

London, Heinemann Publ., 1960.

4. ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ НА КОЛОНКЕ

С ДЭАЭ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

а) Подготовка ДЭАЭ-целлюлозы. Необходимое количество ДЭАЭ-целлюлозы сначала с помощью декантации трижды отмывают дистиллированной водой, а затем последовательно следующими растворами: 0,5 М NaOH, дистиллированной водой, 0,3 М NaH2P04, дистиллированной водой, 0,5 М NaOH, дистиллированной водой и 0,005 М Na2HP04.

Отмывание ионообменника дистиллированной водой всегда проводят до тех пор, пока рН декантируемой воды не станет равным

А Б А Б А Б

1 2 J

Фиг. 41. Градиентное элюнрованне при ионообменной хроматографии.

Буферный раствор, заполняющий резервуар А, имеет ббльшую ионную силу, чем раствор, находящийся в смесителе Б. Градиенты концентрации: / — линейный; 2 — «вогнутый»;

3 — «выпуклый».

рН добавляемой. В последнем цикле отмывания ДЭАЭ-целлюлозу уравновешивают стартовым буферным раствором.

б) Заполнение колонки. Заполнение колонки и уплотнение ионообменника производят с помощью сжатого воздуха. Ионообменник

суспендируют в стартовом буферном растворе, перемешивают до

получения гомогенной суспензии и, заполняя колонку размером

1x60 см, оставляют для оседания. Затем целлюлозу уплотняют

сжатым воздухом под давлением 0,5 атм. После этого проверяют

полноту уравновешивания, т. е. определяют, равен ли рН элюата

рН стартового буферного раствора. Если равенства нет, через колонку ионообменника пропускают дополнительно стартовый буферный

раствор до тех пор, пока колонка не уравновесится.

в) Подготовка градиентного элюирования. Схематическое изображение используемых сосудов, а также типы градиентов представлены на фиг. 41. Объем смесителя, которым может быть любой круглый сосуд, равен 500 мл, объем резервуара для буферного раствора— 1000 мл. Резервуар ставят на 7,5 см выше смесителя. Смеситель заполняют 0,01 М фосфатным буферным раствором рН 8,4, в резервуар заливают 0,3 М буферный раствор рН 4,2. Стартовый 0,005 М фосфатный буферный раствор рН 8,4 подают на колонку из отдельного сосуда.

г) Нанесение сыворотки. 2 мл свежей или размороженной перед

опытом сыворотки в течение суток диализуют против стартового

буферного раствора. Буферный раствор над ионообменником в колонке осторожно удаляют и пипеткой наносят диализованную сыворотку. После ее нанесения остатки препарата трижды смывают отдельными порциями буферного раствора по 2 мл.

д) Хроматография. Сначала хроматографию ведут в стартовом

буферном растворе со скоростью протекания 50 мл/ч до тех пор,

пока не выйдет первый пик. Затем, не меняя этой скорости, начинают

градиентное элюирование. Собирают фракции элюата по 3—5 мл

(всего около 500 мл) и определяют содержание белка в полученных

фракциях либо непрерывной спектрофотометрией,

страница 85
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
цирк запашных официальный 3 ноября
игровые кресла для пк
общественный благотворительный фонд
сдать анализ мочи севастопольская

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(12.12.2017)