химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

олипептиды часто склонны агрегировать или вступать в ассоциации с другими компонентами. Во избежание этого, кроме мочевины, в буферный раствор можно добавлять додецилсуль-фат натрия в концентрации 0,1%. Однако не следует забывать, что этот детергент связывается с белками и делает полипептидные цепи устойчивыми к действию протеаз. Для удаления связавшегося до-децилсульфата натрия лиофилизированные фракции отмывают ацетоном, подкисленным НС1. После такой обработки полипептиды вновь становятся чувствительными к действию протеаз.

Мелкие частицы из препаратов ДЭАЭ-целлюлозы удаляют при отстаивании суспензии и декантации надосадочной жидкости, так же как при обработке КМ-целлюлозы.

Рекомендуемая литература

Kasper С. В. in Needleman S. P. ed., Protein Sequence Determination, p. 165— 180, Springer Verlag, Berlin Heidelberg, New York, 1970.

ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ

А. ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ НА КОЛОНКЕ С ДЭАЭ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

1. ХРОМАТОГРАФИЯ НА КОЛОНКЕ С ДЭАЭ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

В ОН~- ФОРМЕ

ДЭАЭ-целлюлоза благодаря своей функциональной группе — диэтиламиноэтильному остатку — обладает свойствами слабого анионообменника. Ее используют главным образом для разделения природных высокомолекулярных полимеров, особенно чувствительных к резким изменениям рН и температуры, т. е. в первую очередь для фракционирования белков. Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе отличается высокой разрешающей способностью. Этот ионообменник пригоден как для аналитического, так и-для препаративного фракционирования белков на колонках соответствующего размера.

а) Подготовка ДЭАЭ-целлюлозы. Перед заполнением колонки

ДЭАЭ-целлюлозу обрабатывают следующим образом:

1) Необходимое количество ДЭАЭ-целлюлозы в течение 15 мин при комнатной температуре перемешивают в 5-кратном количестве 0,5 н. NaOH и оставляют для отстаивания. Неосевшие мелкие частицы ионообменника декантируют вместе с надосадочной жидкостью.

. 2) Несколько раз ДЭАЭ-целлюлозу отмывают дистиллированной водой до рН 8—9. Отмывание удобно проводить с помощью центрифугирования, при котором частички целлюлозы оседают гораздо быстрее и вся процедура отмывания требует меньше времени.

3) Отмытую ДЭАЭ-целлюлозу смешивают с 3-кратным количеством 96%-ного этанола, оставляют отстаиваться и затем надосадоч-ную жидкость декантируют.

4) Обработку 0,5 н. NaOH проводят еще раз.

5) Целлюлозу отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции с помощью центрифугирования.

Обработанную таким образом ДЭАЭ-целлюлозу можно хранить в виде водной суспензии при 4°С. Следует избегать хранения ионо-обменников при комнатной температуре из-за опасности микробного заражения.

б) Выбор размера колонки. Белки со средним молекулярным весом (около 50 ООО) обычно разделяют на длинных узких колонках.

Для фракционирования 100 мг белка на ДЭАЭ-целлюлозе емкостью

0,7—0,8 мэкв/г нужна колонка размером 1,5x35 см. В зависимости

от свойств фракционируемого белка, содержания в нем примесей, способа элюирования и т. д. размеры колонки могут варьировать как по диаметру, так и по длине.

Проведя соответствующие предварительные опыты, можно рассчитать оптимальные размеры колонки для препаративного разделения больших количеств белка. Чтобы обеспечить оптимальную скорость протекания жидкости через колонку и тем самым достаточно быструю хроматографию, увеличивать объем колонки следует в первую очередь за счет увеличения ее диаметра. Дл<я фракционирования 1,0 г белка со средним молекулярным весом достаточно иметь колонку 3,5 X 45 см.

в) Скорость протекания жидкости через колонку. Задаваемая

скорость протекания жидкости через колонку определяется размерами данной колонки. При микропрепаративной хроматографии

на колонке 1,5x35 см оптимальной является скорость 15—20 мл/ч.

Препаративная хроматография на колонке большего диаметра проводится со скоростью протекания жидкости 25—30 мл/ч; при более

высоких скоростях разделение ухудшается и фракции больше разбавляются.

г) Подбор условий хроматографии. Колоночную хроматографию

на ДЭАЭ-целлюлозе можно вести путем ступенчатого и градиентного элюирования. Ступенчатое элюирование целесообразно только

в том случае, если фракционируемые компоненты элюируются при

сильно различающихся значениях рН и молярности, т. е. когда нет

опасности смешения отдельных фракций.

При любом способе элюирования оптимальные для данного материала условия хроматографии подбираются, исходя из трех уже известных альтернатив: 1) увеличение молярности элюента 2) увеличение рН элюента при постоянной молярности и 3) одновременное увеличение рН и молярности элюента.

Хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе обычно начинают в буферном растворе рН 8 невысокой молярности. Фракционируемый материал растворяют в 0,05 М буферном растворе рН 7,8—8,2 и после нанесения его на колонку ступенчато или с помощью градиента увеличивают молярность элюента сначала до 0,1, потом до 0,5 и наконец до 1,0 М.

Выбор буферного раствора определяется исключительно природой

фракционируемого материала. Если хлориды не вступают с

страница 83
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить шкаф хозяйственный шх 800/500
штатные головные устройства для mazda
накладки на номера
решетки вр-к сезон

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(20.02.2017)