химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

иновую реакцию следующим образом.

В пробирки со сконцентрированными препаратами добавляют по 0,25 млО,2М цитратного буферного раствора рН 5, содержащего 0,2% SnCl2, смесь перемешивают, затем к ней добавляют по 0,25 мл 4%-ного раствора нингидрина в пропаноле, помещают на 10 мин в кипящую водяную баню и охлаждают. В каждую пробирку добавляют по 3 мл 50%-ного пропанола, тщательно перемешивают и колориметр ируют при 570 нм.

Из фракций элюата, соответствующих вершинам пиков, отбирают пробы и электрофорезом или методом «отпечатков пальцев» определяют их гомогенность. Если фракция негомогениа, ее подвергают рехро-матографии.

Относительно рехроматографии вряд ли можно дать какие-либо определенные рекомендации. Ее условия определяются конкретным составом, а также химическими и физическими свойствами анализируемого материала. Однако, по-видимому, наиболее целесообразно вести рехроматографию на смоле в NH^-форме в буферных растворах, содержащих ион аммония, так как в этих случаях полученные фракции содержат летучие соли и одновременно с концентрированием происходит обессоливание. Если, например, фракции элюируют аммонийацетатным буферным раствором, их сначала высушивают под вакуумом при 50° С, а затем растворяют в нескольких каплях дистиллированной воды и лиофилизируют.

Г. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С ДАУЭКСОМ 50X2 В ЛЕТУЧИХ БУФЕРНЫХ РАСТВОРАХ

Принцип метода. Ионообменная хроматография проводится в летучих буферных растворах, что позволяет избежать специальных стадий обессоливания фракций.

Область применения. Препаративное фракционирование пептидов, микроструктурный анализ белков и полипептидов.

МЕТОДИКА

1. Подготовка колонки. Смолу дауэкс 50 х 2 переводят в Н+-форму и в течение 1 ч перемешивают в 0,2 М пиридинформиатном буферном растворе рН 3,1. Затем смолу загружают в колонку и промывают тем же самым буферным раствором, до тех пор пока рН вытекающего раствора не станет 3,1.

2. Приготовление буферных растворов. Для приготовления буферного раствора рН 3,1 смешивают 16 мл пиридина, 32 мл муравьиной кислоты и 950 мл дистиллированной воды.

Для приготовления буферного раствора рН 5,1 смешивают 158 мл пиридина и ПО мл уксусной кислоты и добавляют к смеси дистиллированную воду до конечного объема 1 л.

3. Нанесение препарата. Около 100 мг фракционируемого материала растворяют в 5 мл 0,2 М муравьиной кислоты и наносят на колонку.

4. Хроматография. С помощью автоматического коллектора собирают фракции по 2 мл. Элюирование начинают буферным раствором рН 5,1, а после 150-й фракции начинают градиентное элюирование. В смеситель заливают 500 мл буферного раствора рН 3,1, а в резервуар — буферный раствор рН 5,1.

Из каждой фракции отбирают по 0,2 мл элюата, проводят щелочной гидролиз и затем ставят нингидриновую реакцию (см. стр. 199).

Д. ХРОМАТОГРАФ И Я ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С КМ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

Принцип метода. Группы — СН2СООН КМ-целлюлозы проявляют слабые катионообменные свойства.

Область применения. Фракционирование крупных пептидов для аналитических или микропрепаративных целей.

МЕТОДИКА

1. Выбор КМ-целлюлозы подходящего типа. В продаже имеется несколько типов КМ-целлюлозы. Их можно классифицировать как волокнистые, микрогранулярные и сферические. Волокнистая КМ-целлюлоза, как и другие препараты такого рода, весьма неудобна в работе. Процесс заполнения колонки ею слишком длителен, скорость элюирования с такой колонки мала, и, кроме того, основное неудобство при работе с волокнистой КМ-целлюлозой заключается в том, что ионообменник можно регенерировать только вне колонки. Микрогранулярная КМ-целлюлоза (например, препарат СМ 32 фирмы Whatman) имеет ряд преимуществ: этот ионообменник обладает очень хорошей разделяющей способностью и с ним очень удобно работать. Сферическая КМ-целлюлоза, которая призводится фирмой Reanal (Венгрия), обеспечивает стабильность скорости протекания жидкости через колонку и может быть регенерирована непосредственно в колонке.

2. Обработка КМ-целлюлозы. Независимо от микроструктуры КМ-целлюлозу обрабатывают следующим образом: сначала ее 30 мин перемешивают при комнатной температуре в 15-кратном (сухой вес/объем) избытке 0,5 н. NaOH, затем оставляют суспензию для отстаивания или фильтруют и отмывают дистиллированной водой до рН около 8. Отмытую целлюлозу суспендируют в 15 объемах 0,5 н. НС1, 30 мин перемешивают при комнатной-температуре и отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции.

С помощью такой обработки КМ-целлюлозу удается перевести в Н+-форму; точно так же ее регенерируют после использования. Прежде чем начать хроматографию, необходимо уравновесить КМ-целлюлозу соответствующим «стартовым» буферным раствором.

3. Подбор условий хроматографии. Для разделения любой

смеси крупных пептидов требуются индивидуальные условия фракционирования, поэтому нельзя дать рекомендаций, которые были

бы применимы во всех случаях. Обычно имеются три возможности

изменения условий: а) снижение рН элюента, б) изменение молярности элюента и в) одновременное изменен

страница 81
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
стоимость крыши из металлочерепицы
котлы китурами дизельные морского исполнения
курсы дизайнера декоратора мо ва
бухгалтерский шкаф с ящиком под карточки

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)