химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

воляют выявлять до 2—18 мкг белкового азота в 1 мл [3], с их помощью можно проводить изучение растворов с низкой концентрацией белка, которые не годятся для исследования методом электрофореза.

Электрофорез и классические иммунологические реакции также используются для сравнения белковых смесей и отдельных нативных белков. Однако разрешающая способность этих методов ограничена, так как они дают либо физико-химическую, либо имму-нохимическую характеристику. В сравнении с ними метод иммунодиффузии более информативен, так как с его помощью в двух или нескольких сравниваемых белковых смесях можно обнаружить не только идентичные компоненты, но и возможные общие антигенные структуры, присутствующие в разных компонентах [11—13].

Особое значение приобрела комбинация иммунодиффузии с электрофорезом, названная методом иммуноэлектрофореза[4].С его помощью можно одновременно электрофоретически разделить компоненты белковой смеси и получить их иммунологическую характеристику. Простота осуществления, высокая разрешающая способность и, наконец, очень малое количество материала, требуемое для анализа, ставят иммуноэлектрофорез в ряд наиболее ценных методов аналитического изучения белков. Соединение иммуноэлектрофоре-за с двойной диффузией в геле позволяет выявлять идентичность определенных компонентов двух белковых смесей [10].

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ ИММУНОДИФФУЗИИ

Анализ белков сыворотки осуществляется разнообразными им-мунохимическими методами, но здесь мы коснемся лишь двух методов: двойной иммунодиффузии и иммуноэлектрофорез а. Оба метода нашли широкое и многостороннее применение. Их используют Для исследования нефракционированной сыворотки и для анализа отдельных белковых фракций. С появлением этих методов удалось открыть и охарактеризовать ряд новых белков сыворотки.

В агаровом геле или на ацетат-целлюлозной мембране белковый антиген и специфические антитела диффундируют навстречу друг другу и образуют в месте контакта линии преципитации, которые можно видеть невооруженным глазом или выявить специальным окрашиванием. При анализе двух белковых смесей, например двух разных сывороток или выделенных нативных белков, с помощью этого метода можно не только узнать число индивидуальных белков, присутствующих в нашей системе, но и получить данные об их имму-нохимической идентичности, родственности или различиях. Все эти выводы могут быть сделаны на основании числа и взаимного расположения линий преципитации.

Иммуноэлектрофорез сыграл существенную роль в развитии исследований сывороточных белков. В свое время свободный и зональный электрофорезы позволили проанализировать сравнительно небольшое число индивидуальных белков сыворотки. За исключением 5 классических белков, выявляемых в свободном и зональном электрофорезе, остальные фракции сыворотки не всегда легко поддаются идентификации. Поэтому специальные виды зонального электрофореза с более высокой разрешающей способностью, чем простой электрофорез на бумаге, так и не вошли в повседневную практику клинических лабораторий, сохранив свое значение главным образом для научных исследований. Определение процентного содержания альбумина, a-, J5- и у-глобулинов нередко помогает поставить верный клинический диагноз, но мы должны помнить о том, что фракции белков, гомогенные в зональном электрофорезе, могут включать разные белки, образующие одну фракцию только благодаря сходной электрофоретической подвижности. Об этом свидетельствует также окрашивание липо- и гликопро-теидов.

Согласно современным представлениям, плазма циркулирующей крови содержит свыше ста белков, включая гормоны и ферменты. Возможности электрофоретических методов разделения довольно ограничены; с их помощью удается получить лишь около 20 белковых фракций. Однако иммунохимические методы, особенно иммуноэлектрофорез, обладают большими возможностями: они позволяют идентифицировать до 30 фракций белков сыворотки. Значение иммуноэлектрофореза становится еще более наглядным, если принять во внимание, что с помощью микрометода Шейдигера[16] можно анализировать белок в чрезвычайно малых количествах — до 5—10 мкг.

Если по окончании электрофоретического разделения белков в агаровом геле навстречу им диффундирует специфическая иммунная сыворотка, то в местах встречи антигена и антител образуются дугообразные полосы преципитации, каждая из которых соответствует какому-нибудь одному типу сывороточного белка. Полосы преципитации вполне различимы в нативном препарате, но для лучшего выявления их можно окрасить.

Число линий преципитации на электрофореграмме зависит от используемой иммунной сыворотки. Например, хорошо себя зарекомендовавшая кроличья антисыворотка к белкам сыворотки человека фирмы Behringwerke (ФРГ) и аналогичная лошадиная антисыворотка института Human (Венгерская Народная Республика) позволяют идентифицировать примерно 20 белковых фракций сыворотки. Принципиальная возможность приготовления антисыворотки практически к любому белку значительно увеличивает применимость иммуноэлектрофореза. Кроме того, приг

страница 8
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
билет на концерт тимати 4 ноября
http://www.argumet.ru/seifi/seif4.html
рапродажа канальные жаростойкие вентиляторы
курсы монтажника газового оборудования

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.10.2017)