химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ределении пролина и оксипролина.

Д. Определение триптофана. 0,5 г я-диметиламинобензальде-гида растворяют в 100 мл 95%-ного этанола, содержащего 2 мл концентрированной НС1. С полученным раствором триптофан дает фиолетовое окрашивание.

Е. Определение тирозина. 0,1 г а-нитрозо-р-нафтола растворяют в 100 мл 75%-ного этанола. После опрыскивания этим раствором хроматограмму высушивают и опрыскивают 10%-ным раствором азотной кислоты; Затем ее опять высушивают и в течение 3 мин выдерживают при 90°С. Тирозин и пептиды, содержащие тирозин, дают красное окрашивание на бледно-зеленом фоне.

Ж. Определение глицина. 1) 0,2 г фталевого альдегида растворяют в 100 мл ацетона; 2) 1,0 г КОН растворяют в 100 мл 96%-ного этанола.

Хроматограмму проводят через раствор 1 и высушивают при 100°С, затем проводят через раствор 2 и опять 10 мин сушат при 100°С. В результате реакции глицин дает зеленое окрашивание.

3. Определение N-ацилпроизводных и крупных пептидов в реакции с хлором. Сухую хроматограмму или электрофореграмму в течение 30 мин выдерживают в стеклянном цилиндре в атмосфере хлора, затем извлекают из цилиндра и опрыскивают 1 %-ным раствором крахмала, содержащим 1% KI- Соединения с пептидными связями в молекуле проявляются темносиними зонами или пятнами.

Рекомендуемая литература

Zweig G.y Whitaker J. R.f Paper Chromatography and Electrophoresis. Vol. II, Academic Press, New York, London, 1971.

ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

ПЕПТИДОВ

А. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КИСЛЫХ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С АМБЕРЛИТОМ IR-4B

Принцип метода. Анионообменная смола амберлит IR-4B, используемая в ацетатной форме, при значениях рН раствора между 5 и 6 связывает фракцию'пептидов, обладающих сильнокислотными свойствами, которая может быть затем элюирована в обмен на ионы С1~.

Область применения. Эта смола используется в основном для фракционирования небольших пептидов и выделения кислых аминокислот и пептидов из смеси.

МЕТОДИКА

1. Приготовление колонки со смолой. Для связывания 15 мг дикарбоновой кислоты необходимо около 3,0 г сухой смолы. Смолу (200—400 меш) суспендируют в 0,2 н. уксусной кислоте и оставляют для оседания, Неосевшие мелкие частицы смолы декантируют, а набухшую смолу суспендируют вновь, нагревают до 60° С и перемешивают в течение 1 ч. После декантации смолу 4—5 раз промывают дистиллированной водой и снова нагревают в 0,2 н. уксусной кислоте до 60° С. Смесь перемешивают в течение 1 ч, надосадочную жидкость декантируют, а смолу дважды промывают 0,2 н. уксусной кислотой. После этого суспензию отмывают дистиллированной водой до тех пор, пока рН не станет нейтральным. Приготовленной суспензией смолы заполняют колонку размером 0,5x30 см.

2. Хроматография. Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30—40 мл растворителя, рН раствора подводят до 5—б и раствор медленно наносят на колонку. После нанесения образца через колонку пропускают равный объем дистиллированной воды, а затем начинают элюирование 0,1 н. НС1. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. За ходом элюирования можно следить с помощью нингидри-новой реакции, которую ставят с аликвотами фракций на фильтровальной бумаге: начиная с 11-ой пробирки 1 каплю каждой фракции наносят на лист бумаги Ватман 3, высушивают и проявляют 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Элюирование продолжают до тех пор, пока в отбираемых аликвотах перестанет появляться окраска.

Полученные фракции либо высушивают в вакуумном эксикаторе над КОН или Р2Об, либо лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Применяя градиентное элюирование, можно добиться дальнейшего разделения полученной фракции кислых компонентов.

2. Смолу регенерируют так же, как и перед заполнением колонки.

3. Элюат, полученный в результате промывания колонки дистиллированной водой после нанесения материала перед элюирова-нием 0,1 н. НС1, содержит нейтральные и основные компоненты фракционируемой смеси пептидов.

Б. ХРОМАТОГРАФИЯ ОСНОВНЫХ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С АМБЕРЛИТОМ IRC-50

Принцип метода. Основные пептиды связываются катионооб-менной смолой амберлит IRC-50 (Н+), а затем могут быть элюиро-ваны при повышении концентрации Н+ и тем самым отделены от нейтральных и кислых пептидов, которые не связываются смолой.

Область применения. Фракционирование пептидов при биохимических исследованиях.

МЕТОДИКА

1. Приготовление смолы. Смолу амберлит IRC-50 (200—400

меш) суспендируют в 0,2 н. уксусной кислоте, оставляют для оседания, а затем декантируют надосадочную жидкость. Влажный осадок

суспендируют в 5 объемах 0,2 н. уксусной кислоты и нагревают до

60° С. Через 30 мин суспензию охлаждают, надосадочный слой декантируют и вновь повторяют прогревание в уксусной кислоте.

После этого смолу отмывают дистиллированной водой (большими

объемами) до нейтральной реакции.

Обработанной смолой заполняют колонку 2 X 30 см и промывают дистиллированной водой. В смес

страница 79
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
сигнализации с автозапуском и обратной связью цена с установкой
ok vision new
журнальные столы de купить
обучение программе корел

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)